玛咖酰胺的提取分离及其缓解体力疲劳活性的研究

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1、单位代码：10359密级：公开学号：2015170832分类号：TS201.1HefeiUniversityofTechnology硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION(专业硕士)论文题目:玛咖酰胺的提取分离及其缓解体力疲劳活性的研究专业名称：生物工程作者名称：郑悦导师姓名:张文成研究员吴泽宇助理研究员完成时间：2018年4月合肥工业大学学历硕士学位论文玛咖酰胺的提取分离及其缓解体力疲劳活性的研究作者姓名：郑悦指导教师：张文成研究员吴泽宇助理研究员学科专业：生物工程研究方向：天然产物开发2018年4月ADissertationSubmittedfortheDegreeo

2、fMasterStudyonextraction,separationandanti-fatigueeffectofmacamidesfrommaca(LepidiummeyeniiWalp.)ByZhengYueHefeiUniversityofTechnologyHefei,Anhui,P.R.ChinaApril,2018致谢时光荏苒，三年研究生的学习生涯已接近尾声。回顾过去近三年的时光，收获颇丰。在此，怀着一份感恩的心，谨向一直以来给予我鼓励、支持和帮助的老师和同学们致以最真挚的感谢。首先，诚挚地感谢我的导师张文成教授。在研究生学习的三年时间内，张老师从论文选题、构思到成文都给

3、予悉心的指导，在生活上也给予我无微不至的关怀。张老师渊博的学识、敏锐的思维、严谨的治学态度、朴实谦和的工作作风以及独具特色的人格魅力，都深深的感染和激励了我，让我受益终身。正是张老师耐心的教导和无微不至的关怀使我顺利完成硕士研究生的毕业设计。此外，还要特别感谢吴泽宇老师在我的学习生涯中给予我宝贵的建议和帮助；感谢潘见老师、惠爱玲老师、袁传勋老师、曾庆梅老师、甘昌胜老师、金日生老师在研讨会中给予的悉心指导和鼓励。同时，感谢课题组王冰嵩师兄在研究生阶段给予我的帮助和指导；感谢同窗付传香、王婷婷、朱凯莉、张璐、张傲娜、殷汉玲、曹晶晶、李鸿、李颜、孙忱和田兴，和你们一起进步的三年时光将让我终身

4、难忘！感谢高晗、孟玲、李红红、陈朋朋等师妹（弟）在课题研究期间给予的帮助。最后，感谢我的家人，感谢他们这些年对我的支持和鼓励，使我顺利完成学业。I摘要玛咖酰胺是玛咖中特有的活性成分，具有缓解体力疲劳的功效。由于玛咖酰胺含量较少，且缺乏系统的提取分离工艺，目前关于玛咖酰胺缓解体力疲劳的研究主要集中在活性验证层面上。因此，本研究以玛咖块根为原料，通过酶辅助提取制备玛咖酰胺粗提物，再通过大孔树脂进行分离，最后研究获得的两种玛咖酰胺提取物缓解体力疲劳的活性并对其机理进行简单解析，为后续深入研究玛咖的抗疲劳机制提供科学依据。本论文的主要研究结果汇总如下：（1）以总玛咖酰胺含量为指标，用响应面法优

5、化酶辅助回流提取总玛咖酰胺的工艺。最佳工艺参数为：玛咖粉在纤维素酶添加量为1.5%，温度50℃，pH=4.5柠檬酸溶液中（玛咖粉与柠檬酸溶液料液比为1:4，w/v）预处理2h后，按1:16料液比加入95%乙醇，在70℃条件下回流提取2次，每次2.8h。按此工艺条件提取的总玛咖酰胺含量为2.12mg/g。（2）通过比较四种大孔树脂对玛咖酰胺吸附和解吸能力，得X-5大孔树脂最适合用于玛咖酰胺粗提物的分离。玛咖酰胺粗提取物经X-5树脂分离的最佳工艺为：100mL质量浓度为0.212mg/mL的粗提物，以2mL/min上样流速，上样至柱体积为50mL的大孔树脂柱（约20g树脂，即1g树脂能吸附

6、5mL质量浓度为0.212mg/mL的样液），静置吸附3.5h。先用水洗至洗脱液无色后，再用140mL90%乙醇（1g树脂需要7mL洗脱液），以2mL/min的洗脱流速进行洗脱。收集洗脱液，经浓缩回收溶剂，冷冻干燥，得浸膏中总酰胺含量为17.09mg/g。（3）玛咖酰胺粗提取物（CME）和经分离后的玛咖酰胺提取物（PME）均具有显著的缓解体力疲劳效果，且PME的效果比CME的好。表现为：CME各剂量组比正常组游泳时间延长49.5-77.6%，而PME组则延长95.6-137.5%；PME各组游泳时间比阳性对照组显著延长44.8-75.9%，CME低剂量组与阳性对照组无统计学意义。且PM

7、E高剂量组游泳时间比CME低剂量组显著延长了58.8%。与阳性对照比，只有高剂量PME组肝糖原和肌糖原分别显著提高18.8%和25.2%；BLA显著降低7.26%；两种化合物对BUN效果均不好。CME和PME各剂量组，均比正常组显著降低运动后小鼠血清中LDH（8.10-20.04%），CK（15.29-42.68%）、和NEFA（12.95-23.2%）的水平，且骨骼肌和心肌损伤程度均比正常组和阳性对照组表现轻微。这两种玛咖酰胺提取物缓解体力疲