十氯酮对秀丽隐杆线虫的雄性生殖毒性作用及机制

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1、学校代码：10286分类号：R12密级：公开UDC：614.7学号：152912十氯酮对秀丽隐杆线虫的雄性生殖毒性作用及机制研究生姓名：戴抒豪导师姓名：尹立红申请学位类别医学硕士学位授予单位东南大学一级学科名称公共卫生与预防医学论文答辩日期2018年5月31日二级学科名称劳动卫生与环境卫生学学位授予日期2018年6月20日答辩委员会主席浦跃朴教授评阅人浦跃朴教授倪春辉教授2018年6月20日.硕士学位论文十氯酮对秀丽隐杆线虫的雄性生殖毒性作用及机制专业名称：劳动卫生与环境卫生学研究生姓名：戴抒豪导师姓名：尹立红教授本论文获国家自然科学基金（81273123）资助。MALE

2、REPRODUCTIVETOXICITYANDMECHANISMSOFCHLORDECONEINCAENORHABDITISELEGANSAThesisSubmittedtoSoutheastUniversityFortheAcademicDegreeofMasterofMedicineBYDAIShu-haoSupervisedbyProf.YINLi-hongSchoolofPublicHealthSoutheastUniversityMay2018东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，

3、除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名（＞■：：＾—日期东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、《中国学术期刊（光盘版）》电子杂志社有限公司、万方数据电子出版社、北京万方数据股份有限公司有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的一致，内容和纸质论文的

4、内容相。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅可以公布（包括以电子信息形式刊登）论文的全部内容或中、英文摘耍等部分内容。论文的公布（）授权东南大学研究生院办理包括以屯子信息形式刊登。研究生签名＾师签名ｆｇ中文摘要十氯酮对秀丽隐杆线虫的雄性生殖毒性作用及机制中文摘要研究背景十氯酮(CLD)又名开蓬，是一种人工合成的有机氯农药，由于其存在多种毒性效应，现已被国际社会禁止生产和使用。作为自然界中常见的持久性有机污染物（POPs）之一，十氯酮对环境和人类健康都造成了深远的影响。近年来调查发现我国十氯酮污染情况逐年加重，但国内尚未系统的开展其毒性作用的研究

5、，因此对十氯酮毒效应的研究刻不容缓。研究目的本研究以秀丽隐杆线虫为模型，分别从个体、组织、细胞和分子水平探讨十氯酮对线虫雄性生殖系统的毒作用效应及其诱发生殖毒性的作用机制。研究方法在观察个体水平野生型线虫后代数目、世代时间和雄虫杂交后代数目等指标，评价十氯酮对线虫生育力影响的基础上，通过体视显微镜观察性腺面积、荧光显微镜下观察JK2868突变体性腺远端顶细胞（DTC）发育，DAPI荧光染色测定有丝分裂区、减数分裂区生殖细胞及精细胞数目，微分干涉差显微镜（DIC）下测定精子畸形率，精子活化率等指标探究十氯酮产生雄性生殖毒性作用的靶器官及对精细胞发育过程中的作用靶点。在分子水

6、平上通过实时荧光定量PCR技术测定十氯酮暴露后调控精子活化关键步骤精子主要蛋白（MSP）聚合过程的CEP-8通路基因及调控DNA损伤诱导生殖细胞周期停滞相关基因表达水平变化情况。通过CM-H2DCFDA探针检测线虫体内活性氧自由基（ROS）水平，抗氧化酶试剂盒检测过氧化氢酶（CAT）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性判断十氯酮对线虫氧化应激的影响，RT-qPCR技术测定相关基因gas-1，mev-1，isp-1，sod-1，sod-2，ctl-1的表达水平，并利用自由基清除剂甘露醇探讨对十氯酮造成的生殖毒性保护作用。I东南大学硕士学位论文研究结果十氯酮暴露后，在个体水平上野

7、生型线虫各剂量组后代数目降低，世代时间中高剂量组有所延长；杂交实验结果显示，与空白对照组相比，各暴露组后代数目均有所减少。组织和细胞水平上发现十氯酮暴露造成线虫性腺面积减少，低剂量组面积与对照组相比约减少20%，中高剂量组与空白对照组比较面积减少了约40%；各暴露组的DTC细胞荧光强度与空白对照组比较也有所降低；有丝分裂区生殖细胞数、减数分裂区生殖细胞数和精细胞数均减少并且下降趋势与后代数目相同；精子畸形率升高，活化率下降。分子水平上在对十氯酮生殖毒作用机制研究中发现调控MSP相关基因spe-8，spe-12，spe-19和s