食管癌TET突变体的筛选与鉴定

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1、中文图书分类号：Q5密级：公开UDC：577学校代码：10005硕士学位论文MASTERALDISSERTATION论文题目：食管癌TET突变体的筛选与鉴定论文作者：汪涛学科：生物学指导教师：黄映辉教授论文提交日期：2018年8月UDC：577学校代码：10005中文图书分类号：Q5学号：S201515025密级：公开北京工业大学理学硕士学位论文题目：食管癌TET突变体的筛选与鉴定英文题目：SCREENINGANDIDENTIFICATIONOFTETMUTATIONSINESOPHAGEALCANCER论文作者：汪涛领域：生物学研究方向：细胞生物学与基因工程申请学位：理学硕士学位指导

2、教师：黄映辉教授所在单位：生命科学与生物工程学院答辩日期：2018年10月授予学位单位：北京工业大学独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得北京工业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。签名：汪涛日期：2018年10月25日关于论文使用授权的说明本人完全了解北京工业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；

3、学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。（保密的论文在解密后应遵守此规定）签名：汪涛日期：2018年10月25日导师签名：黄映辉日期：2018年10月25日摘要摘要TET蛋白是一种重要的羟甲基化酶，包括TET1、TET2和TET3，它可以催化5-甲基胞嘧啶（5-methyl-cytosine，5mC）形成5-羟甲基胞嘧啶（5-hydroxymethyl-cytosine，5hmC）。TET蛋白在肿瘤等疾病的发生和发展过程中起着重要的作用。目前，TET2和TET3被广泛的认为是一种抑癌基因，但对于TET1的作用存在争议。基因突变是肿瘤发生的重要原因，T

4、ET蛋白家族在肿瘤中已发现多个基因突变位点，尤其是TET2的突变频率较高，有关TET1突变的报道很少，目前为止TET3的突变报道也仅有一例。研究TET蛋白家族在肿瘤中的突变对分析TET影响该肿瘤发生的机制有重要意义。对临床样本25例食管癌组织和25例癌旁组织进行DNA提取，之后进行TET突变位点的筛选，对于筛选出的突变位点在食管癌细胞系中验证。对临床样本25例食管癌组织和25例癌旁组织进行RNA提取，利用荧光定量PCR技术检测TET在食管癌中的表达情况，进一步结合TCGA数据库对TET1与食管癌的相关性进行临床数据分析。利用位点特异性变异技术对TET1质粒进行定点突变，将野生型和突变型

5、的TET1质粒转染到HEK293细胞中，通过Dotblot检测5hmC的表达量，通过Westernblot检测TET1蛋白的表达量。将野生型和突变型的TET1质粒转染到EC109细胞中，通过MTT细胞增殖实验、细胞划痕实验、Transwell实验来探究此突变对于EC109细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。通过研究我们发现了一种关于TET1的高频错义突变，对应在mRNA上的突变位置及变化为3874A→G，对应在蛋白上的位置及变化为1123I→M，且在食管癌细胞系中也存在此突变。RT-PCR结果显示与癌旁组织相比，在食管癌组织中TET1、2、3均低表达；与正常食管细胞相比，在食管癌细胞系中T

6、ET1低表达。Dotblot和Westernblot结果显示1123突变对TET1的羟甲基化功能和蛋白的表达情况无明显影响，但此突变对细胞增殖、侵袭能力有一定的影响。转染TET1及1123突变质粒对EC109细胞增殖和侵袭能力的抑制作用有显著性差异，RT-PCR结果提示转染1123突变质粒引起的EC109细胞增殖和侵袭能力下降增强可能与GLUT1、MTA2基因表达下调相关，为食管癌的早期鉴定提供了新的思路。关键字：DNA羟甲基化酶；TET蛋白；突变；食管癌IAbstractAbstractTETproteinisanimportanthydroxymethylatedenzyme,in

7、cludingTET1andTET2andTET3,couldcatalyze5-methyl-cytosine(5mC)toform5-hydroxymethyl-cytosine(5hmC).TETproteinplaysanimportantroleintheoccurrenceanddevelopmentoftumorsandotherdiseases.Currently,TET2andTET3arewidelyconsideredto