活性维生素D对非酒精性脂肪性肝病的保护作用及机制初探

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1、分类号：R589.9学校代码：10062密级：学号：2014701023博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：活性维生素D对非酒精性脂肪性肝病的保护作用及机制初探TITLE:ThepreliminarystudyofprotectiveeffectsofactiveformofvitaminDfornonalcoholicfattyliverdisease一级学科：临床医学二级学科：内科学内分泌与代谢病论文作者：朱崇贵导师：朱梅天津医科大学研究生院二〇一七年十一月分类号：R589.9学校代码

2、：10062密级：学号：2014701023学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：活性维生素D对非酒精性脂肪性肝病的保护作用及机制初探TITLE：ThepreliminarystudyofprotectiveeffectsofactiveformofvitaminDfornonalcoholicfattyliverdisease一级学科：临床医学二级学科：内科学内分泌与代谢病论文作者：朱崇贵导师：朱梅导师组成员：李凤翱天津医科大学研究生院二〇一七年

3、十一月天津医科大学博士学位论文中文摘要研究目的：非酒精性脂肪性肝病（Nonalcoholicfattyliverdisease，NAFLD）在全球多个地区的发病率逐年增加，在肥胖人群中的发病率更是高达58％～74％。NAFLD是一种临床综合征，指与胰岛素抵抗相关的肝脏脂肪过度蓄积，肝活检显示5％以上肝细胞脂肪变；同时需除外酒精性和其他明确因素所致的肝损害；“非酒精性”是指男性每天乙醇摄入量少于30克而女性少于20克；NAFLD实则为一疾病谱，是从非酒精性单纯性脂肪肝（Nonalcoholicfattyliver，N

4、AFL）、至非酒精性脂肪性肝炎（NonalcoholicSteatohepatitis,NASH）再到肝细胞癌的一个连续过程。NASH是NAFLD最重要的阶段，从NAFL进展至NASH是NAFLD发展的关键步骤。NAFLD发生发展涉及多种机制，包括氧化应激、炎症、内质网应激及脂毒性等等。而“二次打击”学说仍被认为是最重要的发病机制，故改善氧化应激是防治NAFLD的关键靶点之一。在对抗氧化应激方面，机体抗氧化酶系统起着关键作用。其中，转录因子NF-E2相关因子2（NF-E2-relatedfactor2，Nrf2）通

5、路所介导的抗氧化酶系统对NAFLD尤其是NASH起到保护作用。目前已经发现众多物质，如姜黄素等可以激活Nrf2通路，但大都很难用于临床治疗。近年研究结果发现维生素D具有免疫调节、抗炎、抗纤维化、抗氧化应激等作用，且多项研究证实维生素D在多种肝脏疾病（如丙型肝炎）中起到抗炎等重要作用。虽然维生素D有一定的抗氧化作用，但维生素D与NAFLD的氧化应激之间关系的研究报道并不多见。我们推测维生素D很可能通过缓解氧化应激对NAFLD起到保护作用。本研究主要观察活性维生素D-1,25(OH)2D3是否上调肝细胞Nrf2通路，增

6、强其下游抗氧化信号因子的表达，减轻氧化应激，延缓NASH的进展，为NAFLD防治提供新思路。研究内容：高脂喂养大鼠建立NAFLD动物模型，观察在高剂量1,25(OH)2D3干预下，大鼠肝脏NAFLD病理改变并评价Nrf2通路信号因子表达的变化。高脂和1,25(OH)2D3干预HepG2细胞，评价细胞中氧化应激程度，并检测抗氧化酶活性和Nrf2通路信号因子表达的变化。研究方法：第一部分为体内试验（动物实验）：共36只雄性SD大鼠，首先随机分为普通饲料组10只，高脂饲料组26只，适应性喂养4周。高脂饲料组再随机分为高脂

7、组（HFD组，n=13）和高脂1,25(OH)2D3干预组（HFD+VD组，n=13，1,25(OH)2D35μg/kg，腹腔注射，每周两次），再喂养16周后处死大鼠。记录大I天津医科大学博士学位论文鼠一般情况，处死后测量肝重，计算肝重-胫骨比，行高胰岛素-正葡萄糖钳夹实验证明是否存在胰岛素抵抗；检测血肝功能、血脂、钙磷及肝内甘油三酯生化指标，制备肝脏石蜡切片，行HE、Masson和油红O染色方法观察肝脏炎症、纤维化和脂肪变程度，并评价肝脏病理改变；应用免疫组织化学方法测定肝组织细胞中Nrf2蛋白表达；测定大鼠肝脏

8、氧化应激指标，包括丙二醛和8-异前列腺素F2α；qRT-PCR方法测定Nrf2及其靶基因mRNA表达水平。第二部分为体外试验（细胞实验）：采用人肝癌细胞HepG2细胞系作为研究对象，分为对照组（CON组）、高脂培养组（HF组，软脂酸：油酸=1:2，0.1mmol/l）和高脂-71,25(OH)2D3干预组（HF+VD组，1,25(OH)2D3，10mol/L