2012.4.19PCR标准化意义(福州)

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1、CML患者定量PCR国际标准化意义及展望目录CML分子学监测标准化的背景及挑战分子学监测标准化的解决方法国内目前的PCR报告及国际标准化PCR报告范例2随着格列卫®治疗时间的延长疾病负荷呈现下降趋势检测MRD需要高度灵敏的检测技术RadichJP.Blood.2009;114:3376-3381.Dx,诊断;FISH,荧光原位杂交疾病负荷与检测BCR-ABL转录本(log10)Dx降低~5Log降低1~2-log细胞遗传学FISHRT-PCR治疗时间(月)时间分子学监测的优势采用实时定量聚合酶链反应P

2、CR(RQ-PCR)进行分子学反应的检测该检测与常规细胞遗传学反应检测相比更灵敏,超过3个对数级对外周血样进行RQ-PCR检测,相对于骨髓样本检测更方便RadichJP.Blood.2009;114:3376-3381.分子学反应对疾病预后的意义分子学反应的程度、持续时间及早期获得与长期疗效的改善相关获得MMR与较高的EFS率、PFS率相关1.BranfordS,etal.Leukemia.2003;(17):2401-2409;2.Quintas-CardamaA,Blood.2009;113:63

3、15-6321;3.MüllerMC,etal.Blood.2008;112(11):129;4HughesTP,etal.Blood.2008;112(11):129-130;5.PressRD,etal.Blood.2006;107(11):4250-4256;6.IacobucciI,etal,ClinCancerRes.2006:12,3037-3042:7.CortesJ,etal,ClinCancerRes;2005;11:3425-3432;8.PaschkaP,etal.Leukemi

4、a;2003;17:1687;9.PressRD,etal.ClinCancerRes.2007;13:6136-6143;10.KantarjianH,etal.Cancer.2008;112:837-845.分子学是未来CML治疗的监测趋势分子学监测需要统一标准(国际标准,IS):IRIS研究:3个参与实验室采用BCR作为对照基因,将30例CML患者的平均BCR-ABL水平定义100%国际标准(IS):将每一个实验室测定值与IRIS基线相比如减少3-log(0.1%),定义为获得MMRCML分子学

5、监测的标准化:背景6Hughesetal.,Blood.2006Jul1;108(1):28-37.BCR-ABL的国际标准(IS)的定义[IRIS基线][IRISMMR;减少3-log]当地测定0.1%1%0.01%10%0.001%100%转换因子/对照样本国际标准BCR-ABL转录本水平高(其他对照基因?)不同的引物/探针7已经制定了一套国际标准(IS),来统一不同实验室获得的BCR-ABL值1,2分子学监测的标准化1.BranfordS,etal.Blood.2008;112:3330-333

6、8.2.HughesT,etal.Blood.2006;108:28-37.IRIS:国际随机干扰素和STI571研究IRIS研究涉及实验室阿德莱德实验室曼海姆伦敦其他实验室国际标准(IS)样本送检其他实验室标准化后比较不同实验室获得的分子学结果获得转换因子IS标准化×转换因子8未进行基线标准化严重影响患者疗效的正确评估0.001%0.1%0.01%1%10%100%107108109101010111012BCR-ABL比率(IS)白血病细胞数MMR标准化基线未获得MMR2例患者与各自的基线值相比均

7、减少3-log,但是仅有患者A获得MMR单个患者的基线9缺乏转换因子导致实验室无法准确报告患者的疗效0.001%0.1%0.01%1%10%100%107108109101010111012BCR-ABL比率(IS)白血病细胞数MMR标准化基线0.11%x0.83(cf)=0.09%ISMMR0.1125%IS未获得MMRx1.25(cf)0.09%没有CF,实验室无法报告患者是否获得了MMR10目录CML分子学监测标准化的背景及挑战分子学监测标准化的解决方法国内目前的PCR报告及国际标准化PCR报告

8、范例11如何正确定义分子学反应ELNrecommendations,BaccaraniM,etal.JClinOncol.2009;27(35):6041-6051.完全分子学反应(CMR)对连续两次收集到的高质量的血液样本进行实时定量或巢式PCR检测(灵敏度10-4),检测不到BCR-ABLmRNA转录本主要分子学反应(MMR)在国际量表中BCR-ABL与ABL(或其他管家基因)的比率≤0.1%**国际量表的标准是:100%作为标准的基线;0.1%为比

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