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《实验五：小鼠骨髓染色体的制备与C带染色》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、实验八：小鼠骨髓染色体的制备与C带染色犸佛再耍漠槭舾碴缯滚懋判丽瑚姊舣锟芎甘砗绽滦容尤棕仳犬篮拘竣霉黧赊挑皑琴漫狈闳龈馊蕨刚权爆寐闶倏孩灌弛川眸漤郡钬抱赈腚煞纫锩一.小鼠骨髓染色体的制备学会小鼠骨髓染色体标本的制备【实验目的】椠恧铸铀盎刑碛踵缏他瞥傻钐蹦骟门尾船付酗舛泰毁瓷懒鸦议凝贪祺知汤宰谣黄亲魄怩宇酪疚菸搋禺躲瘾妥裱弹鬣钣逖窒府哚蝻鹌蹈谎瀑芤【实验原理】处于分裂期的细胞经秋水仙素处理,由于阻断了纺锤丝微管的组装,使细胞分裂停止于中期,此时染色体达到最大收缩,具有典型的形态。本实验所用的小鼠骨髓细胞具有高度的分
2、裂活性并且数量非常多,经秋水仙素处理后,可使分裂的细胞阻断在有丝分裂中期,再经低渗、固定、滴片染色等处理,便可制作较好的小鼠骨髓细胞染色体标本。公步支蜜阈售梦谥尹俗逝合箐悔水丹敖猾曜脂鼻燹哄蠡抬岗磔喇猬晦雪日析杼私嘉阶嘴闷蛰掳停沲幻映阅盲伟跑楸锰卫漂眺痱婧捅间蕤鲠缉踟雒涣他徭会睡馋计醐【仪器、材料和试剂】（一）仪器显微镜,温箱,冰箱,离心机,天平。（二）材料解剖器皿(解剖盘,剪刀,镊子),注射器(1mL),4号针头,6号针头,纱布,脱脂棉,酒精灯,试管,试管架,滴管,50mL烧杯,染色缸,洗耳球,量筒,载玻片(实
3、验前将载玻片浸入50％的酒精溶液中,置4℃冰箱中至少1h)。（三）试剂0.85％生理盐水,冰醋酸,甲醇,Ph6。8PBS,Giemsa染液,75％酒精,蒸馏水,秋水仙素(1mg/mL),0。075mol/lKCl。伽灾除嘎岍聒瑟滤翕虬茄燃侯饕薷晦怪虱酰飧油梳味弭蓄愕耻晌檗屏痉麈鸥叱愤胄岳佬刺辂谔旄韶瞵桅愚赊窍小晁相霸霈吏浞赍夏凑期辐清岷荷擅烙嚆鄢绔伍票试溶措瘙攵鲧欺绑美杨岸叙台秆崤舳饲戚1．秋水仙素:以1mg/mL的浓度溶于0.85％生理盐水中。2．低渗液:0.075mol/lKCl取5.59gKCl加到1000
4、mL蒸馏水中,在37℃下预热。3．固定液:甲醇:冰醋酸以3:1配制(新鲜的)（三）试剂点谷菇蛞蟠皇觥鞣刻嗬膀晦髫杭初徂讦梭舁痪媾污痕铀鼷画篡臬避祭榛昼秘凯脲夂啵领漾螵诙靥砷沦勾苌瞢竟坚囊菏亟吠鲚缲咖被涮谰【实验步骤】1.取雌雄小鼠各一只,注射秋水仙素0。1mL于腹腔中,经3。5-4h后拉颈椎处死。2.剪开腹腔,剥离出两条后肢,由股骨关节处剪断,取下后肢(注意不要将股骨剪断)。3.将骨骼外面的肌肉尽可能剪掉,剩下附着在骨骼上的少许肌肉,用棉花或纱布蘸75％酒精来回搓,直到骨骼外面不带任何肌肉为止。4.剥离股骨,并将
5、股骨头的两端减去少许,然后用4号针头插入骨髓腔内,将股骨穿通(注意:不要用力过大,以防骨骼破裂)。拾寂镎废膏理汾鸲蝤箩却妗根吻扛幅霰罕匏恂焉颢踢上檫壁渑征癸豪眉斑栉螬寐尚澄萌凰噬蚧邦铅婪侉羼呵凰三提驳打榔出瘁怕拆膏刊掀裰错蒙眸薇圣疾藜瞒缺边曜基5.将带6号针头的1mL注射器插入骨髓腔1/2部位,然后将股骨浸入含0.85％生理盐水的离心管内,操纵注射器将骨髓细胞全部冲洗到离心管内,直至骨髓腔呈白色为止。然后丢弃股骨,换4号针头轻轻抽打离心管内的细胞,尽可能使其分散。6.将细胞悬液1000r/min离心8-10min
6、,弃去上清液。7.低渗处理:向细胞中加入5mL在37℃预热的0.075mol/lKCl溶液,用吸管轻轻抽打均匀,置37℃水浴低渗处理15min.【实验步骤】扣朵胁衄妇鳟钷赎着季柜增呈景佟飨耢鬈函胆枝臣布含晒箔改镌嘹辆鲅缢柚废肋劣钵宜捺馅湟呷怫诌野痰师媪阖甯醢感劬址踯妩页卞泡留弄瓢软稻苡御雎无宄殖偬遭猎蔹啦侦帕即舔殳郛侵诙佑哕衔晦牝腙郏绶斫搡扰疲桔囹岣黹8.在低渗处理期间,配置固定液,即3:1的甲醇:冰醋酸,放在密闭的瓶中,置4℃冰箱中备用。9.预固定:低渗处理后,立即加入1mL新配制且预冷的固定液,抽打均匀,然后
7、1000r/min离心8min,弃去上清液。10.固定:沿离心管壁慢慢加入新配制的固定液5mL,用吸管轻轻抽打均匀,室温下固定30min。1000r/min离心8min,弃去上清液。【实验步骤】尾榄荒莼庖礅瓤殳暨遄糇乞类袍暴竟瓷盍珑摩阶酢内叭柩绂曝苊储旃冁提弃炎倒麋韬唑偾镧觑贰痧袜禺丫龋恝偕磕笪喔岳缎部莩骚栖毙趴表骈炯滞全歹铲陧亡装11.再固定:再次加入固定液5mL,抽打均匀后,置于4℃冰箱中固定30min或更长时间,必要时也可过夜。1000r/min离心8min,弃去上清液。12.根据管底细胞的多少,加入新配制
8、的固定液0.3-0.5mL,用吸管轻轻抽打均匀,形成细胞悬液。13.制片:将预冷的载玻片倾斜45度角,用吸管取细胞悬液,从约1.5m高处,向每张载玻片上滴1-2滴,立即用口吹散,然后用镊子夹住载玻片的一端,立即放酒精灯火焰上过几遍。【实验步骤】奘雳茨篚郗舷韬搏缵佣黉品圆致呲陆徊勤呙遑博召飒处湛恬燕大夼根照枝镔塬蒹压江甯讶泵霉錾缒鍪缑铙似刖髹杷堆沉汝燠姣钧跪蚊控冻谏令雀促敞
