《蛋白质的沉淀反应》PPT课件

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1、动物生物化学实验教学地点：逸夫楼2003实验基本教育和基本操作训练蛋白质的沉淀反应和两性反应蛋白质透析脱盐实验一动物医学院动物生物化学教研室了解生化实验的基本目的和要求熟悉生化实验的常用仪器了解蛋白质的沉淀、盐析、两性反应及透析脱盐的原理掌握蛋白质盐析和透析等操作技术目的实验基本教育和基本操作训练动物生化实验的重要性生化分析技术与本专业之间的关系本学期实验安排与要求考核总分100：40%为实验理论（闭卷）30%为实验技能操作40%平时（包括实验报告和平时）实验安排共有9个实验：动医、动药专业27学时（包括1-8个实验）动科、水产专业18学时（包括1-6个实验）实验一

2、实验基本教育和基本操作训练蛋白质的沉淀反应和两性反应，蛋白质透析脱盐（3学时）实验二蛋白质的定量测定----双缩脲法测定蛋白质浓度（3学时）*实验三唾液淀粉酶的活性观察（3学时）实验四电泳技术概论血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳（3学时）实验五聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分离血清蛋白（3学时）*实验六层析技术概论分子筛凝胶过滤分离血红蛋白和核黄素（3学时）#实验七无蛋白血滤液的制备血糖的测定（3学时）*实验八动物肝脏中DNA的提取和鉴定（3学时）*实验九脂质的提取与薄层层析（3学时）#注：*为综合性实验#为设计性实验实验报告实验目的实验原理（简明，扼要）试剂与器材（简单，主要试剂与

3、器材）实验步骤（详细）结果讨论（实事求是，准确）实验1蛋白质的沉淀反应蛋白质的水溶液是稳定性的胶体溶液稳定的原因有两个1水膜2电荷蛋白质沉淀物理化学因素影响下，蛋白质稳定性遭到破坏，以固体的形式从溶液中析出的作用。包括可逆沉淀和不可逆沉淀可逆沉淀（盐析和盐溶）盐溶（saltingin）纯水或低盐溶液中溶解度较低的蛋白质，通过增加无机盐使溶解度增加盐析（saltingout）高浓度的中性盐类可以脱去蛋白质分子表面的水膜，并中和蛋白质分子的电荷，从而使蛋白质从溶液中沉淀下来的过程常用的中性盐：硫酸铵，氯化钠，硫酸钠等不可逆沉淀有机溶剂沉淀：如乙醇、丙酮、生物碱试剂沉淀:如苦

4、味酸、三氯醋酸（TCA)、钨酸等.在pH值小于蛋白质pI时，其酸根负离子能与蛋白质分子上的正离子相结合重金属盐沉淀：金属正离子与蛋白质分子中负电荷结合加热或改变pH等本实验选用卵蛋白（结合蛋白）卵清蛋白球蛋白角蛋白粘蛋白等从卵蛋白中分离出清蛋白和球蛋白？实验2蛋白质的透析脱盐透析法（dialysis）蛋白质是生物大分子，分子的直径在1-100nm之间，不能通过半透膜（有微孔的膜）；而无机盐等小分子化合物能自由通过半透膜。利用这一特性，将蛋白质与小分子化合物分离开来。这就是透析本实验利用透析的方法把实验一盐析中所用硫酸铵去掉，达到分离纯化的目的实验所用半透膜：玻璃纸实验3

5、蛋白质的两性实验---酪蛋白pI的测定蛋白质与氨基酸类似，是两性电解质蛋白质分子在等电点时不带电荷，溶解度最低，容易聚集沉淀本实验利用溴甲酚绿做指示剂，根据颜色的变化和等电沉淀的原理，确定待测蛋白酪蛋白的pI实验步骤见讲义实验结果从卵蛋白中分离并纯化出清蛋白和球蛋白，确定可逆和不可逆沉淀剂?纯化所分离出的清蛋白和球蛋白确定酪蛋白的pI?注意事项用干滤纸硫酸铵缓慢加入玻璃纸用橡皮筋扎紧思考题等点沉淀的原理？盐析、透析及其原理？