利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生

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1、利用核磁共振波谱研究慢性心衰心气虚证心肌能量代谢的病生理机制林谦李岩北京中医药大学东方医院第二届全国中西医结合心血管病中青年论坛第二届黄河心血管病防治论坛——国家自然基金项目(No.30772693)10/16/2021立题依据研究内容、目标实验结果讨论与结论内容概述10/16/2021动力泵、高耗能能量不足引起的能量超负荷性心肌病心脏特点01心力衰竭02CHF实质能量产生不足、消耗增加03立项依据现代医学对CHF和心肌能量的认识10/16/2021立项依据1234“气”能量相似性心气虚CHF基本病机中医治疗CHF特色优势益气治疗CHF心气虚证效

2、果显著中医对“气”和心气虚的认识10/16/2021立项依据慢性心衰心气虚证能量代谢心肌能量代谢障碍↓病理生理关键环节心气虚证↓慢性心力衰竭基本病机能量代谢障碍↓CHF心气虚证研究的切入点ADP+PiCr+PiATPPCrCK穿梭机制心肌能量代谢及其调控机制直接能量物质能量储备物质mi-CKCK-MM/MB/BB立项依据血流动力学能量调控-CK穿梭机制能量物质-ATP、PCr提高能量物质含量维持CK穿梭机制益气药通过提高心肌能量物质含量、维持CK穿梭机制治疗心气虚证心气虚证提出假说10/16/2021研究内容复制CHF心气虚大鼠模型益气药物治疗模型

3、大鼠心气虚证指标血流动力学慢性心衰心气虚证心肌能量代谢障碍CHF不同时相心肌能量物质动态变化能量调控机制关键分子基因表达水平心气虚10/16/2021动物实验造模、干预、血流动力学分子生物学基因及蛋白质表达核磁共振心肌能量物质水平理论升华心气虚证实质从心肌能量代谢角度进一步阐明心气虚证实质研究目标假手术结扎冠脉左心室插管RT-PCR31P核磁共振波谱技术路线10/16/2021研究方案-动物分组动物实验分组及给药LMZXJ假手术组：不结扎冠状动脉，术后给予生理盐水联合用药组：术后给予党参、黄芪＋卡托普利中药组亚组1:术后予党参；亚组2:术后予黄芪；

4、亚组3:术后予党参＋黄芪（益气组）模型组：术后给予生理盐水西药对照组：术后给予卡托普利10/16/2021心率加快a心悸呼吸频率加快b气短、气促活跃程度下降反抗轻微c神疲力竭性游泳时间缩短d乏力研究方案-一般状态检测指标心气虚证10/16/2021研究方案-血流动力学监测心电颈动脉插管心室内压舒缩功能心脏功能左室舒张末压血流动力学检测左室收缩压左室收缩压最大变化速率左室舒张压最大变化速率收缩功能舒张功能10/16/2021保存提取样品制备实验参数数据处理核磁共振波谱检测流程大鼠心脏组织液氮急冻。用1:1的CH3CN:H2O匀浆、离心取上清液水提残渣

5、加入重水混匀，离心取上清液加入核磁管中，加入TSP/D2O溶液和MDP/D2O溶液（终浓度2mM）谱宽sw=12000，采样点np=8192，90度脉冲宽度pw=14.1，弛豫延迟时间d1=17s，采样次数nt=100，采样温度为27℃。对所得NMR数据经傅立叶变换得到谱图，然后调整相位并进行基线校正研究方案-能量物质10/16/2021研究方案-能量物质PCrATPPCr/ATP31P核磁共振波谱检测1.心气虚证与心肌能量物质含量的相关性2.益气药对心肌能量代谢的影响10/16/2021心肌组织能量调控机制mi-CK反映能量从ATP→PCr并存储

6、的能力CK同工酶反映PCr→ATP并加以利用的能力运用RT-PCR法检测mi-CK和CK-M亚基、CK-B亚基的mRNA表达水平Westernblot法测定mi-CK、CK-MM、CK-MB、CK-BB蛋白质水平研究方案-分子生物学分子生物学检测10/16/2021实验结果-心衰模型的建立心脏冠脉结扎位点心衰心脏（梗死区清晰可见，左心室扩大、室壁变薄）10/16/2021实验结果-一般状态模型组大鼠较假手术组一般状态差，心率加快，力竭游泳时间缩短，各用药组较模型组有所改善与假手术组相比，*P<0.05，**P<0.01；与模型组相比，△P<0.05

7、，△△P<0.0110/16/2021实验结果-血流动力学左心室内压曲线左心室dp/dt曲线+dp/dtmax:收缩功能-dp/dtmax:舒张功能10/16/2021实验结果-血流动力学与假手术组相比，*P<0.05，**P<0.01；与模型组相比，△P<0.05，△△P<0.01模型组大鼠心脏收缩功能明显下降，各用药组较模型组有所改善，中药组及联合用药组改善更为明显模型组大鼠心脏舒张功能明显下降，各用药组较模型组有所改善，党参组及联合用药组改善更为明显10/16/2021实验结果-能量物质外参照物磷酸肌酸PCr三磷酸腺苷ATP10/16/202

8、1实验结果-能量物质模型组大鼠心肌能量储备物质PCr含量明显下降，各用药组均有回升，党参组、益气组及联合用药组更为显著与假