利用骨龄学方法研究巫山角蟾的种群结构

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1、利用骨龄学方法研究巫山角蟾种群结构指导教师：卜书海负责人：徐诺然组员:谭小曼黄宏恩郭志芽概述立论依据研究方案经费预算立论依据巫山角蟾是中国特有的两栖类，其野生资源日益减少。对巫山角蟾的生态学研究可以揭示生物与环境的适应机制，从而促进对其生活史进化的理解，而且由于对于环境的敏感性，两栖类一直是环境变化的重要指示物种，巫山角蟾的研究有利于促进对其所栖居环境的保护。研究意义立论依据骨龄学方法是通过骨组织来鉴定动物年龄的一种方法，已成功应用于两栖类和爬行类，特别适用于生活周期明显物种。对于研究寿命、死亡率、种群结构、繁殖等具有重要作用。研究意义巫山角蟾

2、是无尾目角蟾科的一种，而在宁陕，巫山角蟾是这一地区的新分布种，种群数量未知。巫山角蟾主要分布在山区小溪流及其附近林区。六月中旬左右为交配期。立论依据研究现状立论依据研究现状骨龄学方法通过制作骨组织切片观察LAG数目来判断动物年龄。有明显生活周期的动物，在生长季节生长迅速，因此这一阶段新长的骨组织较厚，而在生长停滞期（一般是冬季）形成的骨组织较薄，也叫生长停滞线（LAG），一般是每年新生长一条LAG。所以LAG与动物的年龄对应。观察两栖类年轮线最好的骨骼部分是第三或第四趾的趾骨，因为是辐射生长，易于观察。研究方案研究目标通过对巫山角蟾的骨龄学研究

3、，揭示其生长发育与年龄的对应关系，构建生长模型，研究其种群结构。为这一物种的保护和研究提供依据。研究方案研究巫山角蟾栖息生态环境的多样性验证骨龄学方法对巫山角蟾的适用性研究巫山角蟾作为宁陕新分布种的种群年龄及生长发育情况研究内容拟解决的关键问题研究方案趾骨切片LAG数目的判断在观察切片时，往往会因为栖息环境的变化而导致生长缓慢而出现附加线，会干扰LAG数目的判断骨的重吸收会导致LAG的不完整，也会影响LAG的数目，从而使得LAG数目偏小一些年老的个体里，由于年轮线靠得太近，导致染色的LAG重叠在一起，难以判断。实验方案实验方案1、夜间在预定区域

4、捕捉巫山角蟾，测量体长、体重，记录下性别与数量，剪下第三或第四趾浸在福尔马林中保存编号标记。记录下其生活环境的特征2、将采集好的趾骨样本按照技术路线进行固定、染色、浸蜡等操作制作趾骨切片。3、在显微镜下记录每个样本的LAG数目。4、根据得到的数据用VonBertalanffy公式Hemelaar（1988）模型SVLt=SVLmax–（SVLmax–SVLmet）e-k（t-tmet）构建生长模型，分析巫山角蟾的种群构。研究方案野外采样封片剪第三或第四趾骨固定观察分析、得出结论脱钙、染色（苏木精-伊红）包埋、修蜡浸蜡流水蓝化脱水、透明脱蜡镜检、

5、照相烤片切片修蜡贴片和展开技术路线研究方案创新之处对于巫山角蟾的研究，首次采用骨龄学方法对其进行年龄测定。一方面验证骨龄学方法对巫山角蟾的实用性；另一方面，通过年龄测定，构建生长模型，来揭示其种群特征。研究方案预期成果1、验证骨龄学对巫山角蟾是否适用2、揭示宁陕地区巫山角蟾的种群结构3、发表一篇论文研究年度计划时间计划2013年11月~2014年4月查阅资料，前期准备2014年5月~2014年7月去宁陕采集样本、数据2014年8月~2014年10月骨龄学方法测定年龄、结果分析、撰写论文经费预算支出项目金额（元）计算根据及理由合计3620科研业务

6、费合计1520路费1040从杨凌到宁陕65元*4人*4次往返=1040住宿4804人*40元*3天=480实验材料费合计2100试剂1200苏木精、蜂蜡、二甲苯等耗材900染色缸、载玻片、标本盒等Thanks!项目介绍完毕，谢谢观看！