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时间:2019-05-10
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1、生物技术前言生物技术四大体系生物技术新浪潮一、生物工程形成简史传统发酵酿酒、制酱制醋技术;1860年,巴斯德单一霉菌纯粹培养技术;1878年,啤酒酵母单一培养技术;1881年,细菌的纯粹培养技术;1929年,抗菌素盘尼西林发现;1946年,用细菌可以生产氨基酸;1952年,用微生物转化荷尔蒙获得成功;前言一、生物工程形成简史1953年,Waston、Crick提出了DNA双螺旋结构;1972年,美国斯坦福大学构建了第一个重组DNA分子;1977年,在美国旧金山建立了世界上第一家遗传工程公司。二、生物工程定义生物工程是生物技术的总称,是对生命有机体在分子水平、细胞水平、
2、组织水平、个体水平进行不同层次的创造性设计和改造,使之能定向组建具有特定性状的新物种或新品系,从而造福人类的现代应用技术学科。生物工程主要包括细胞工程、基因工程、酶工程、发酵工程和生化工程等。三、研究生物工程的意义使人类进入了按照自己的需要人工创造新生物的伟大时代;它是世界新技术革命的三大支柱之一(信息、材料、生物工程),具有相当大的潜在生产力。生物技术的四大体系基因工程细胞工程酶工程发酵工程一、基因工程定义基因工程就是从生物体中把生物遗传物质分离出来,或人工合成一个DNA分子,用人工的方法对遗传物质进行搭配、组合,然后转入某细胞内,通过改变其遗传物质的结构,来改变它
3、的遗传特性,使之定向地产生符合人类需要的新型生物物种、类型。1、用于分子生物学研究2、用于改造生物,创造对人类有用的新品系、新物种。基因工程用途限制性内切酶是生物工程中最重要的工具酶,主要从原核生物中提取,它能识别双链DNA分子中的特异性核苷酸序列,使它在特定的位点水解。基因工程的基本过程EcoRI识别序列:GAATTCCTTAAG并切割如下:5’NNNNGAATTCNNN3’3’NNNNCTTAAGNNN5’限制性内切酶PstI识别序列:CTGCAGGACGTC并切割如下:5’NNNNCTGCAGNNN3’3’NNNNGACGTCNNN5’限制性内切酶在基因工程中
4、的运载体包括:质粒载体噬菌体载体复合载体病毒载体载体是细菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体以外的双链闭合环状分子,大小为1-200Kb,能独立于染色体外进行自我复制。它的拷贝数较多,每个细胞中可含10-200个拷贝。其表型效应主要有决定抗药性,合成抗菌素,编码限制或修饰酶等。质粒载体染色体质粒pBR322质粒图谱是一种细菌病毒,可作为克隆载体。其优点是可以在体外包装产生感染性很高的噬菌体颗粒。噬菌体载体噬菌体头部尾部尾丝噬菌体感染细菌示意图病毒载体这是一类真核载体,能把基因引入到真核细胞中,并在其中被表达。因此是研究真核细胞表达及调控的有力工具。如:腺病毒、乳头瘤
5、病毒、疱疹病毒等。复合载体1、从生物基因组中分离得到基因组DNA酶切产物总RNAmRNAcDNA2、人工合成化学合成PCR(聚合酶链式反应)分离逆转录基因工程步骤一--获得DNA片段,取得目的基因基因工程步骤二--DNA片段和载体DNA在体外连接外源DNA质粒酶切位点酶切位点酶切酶切混合DNA连接酶基因工程步骤二--DNA片段和载体DNA在体外连接质粒DNA外源DNA酶切酶切外切酶外切酶膜端转移酶膜端转移酶DNA聚合酶DNA连接酶加热并慢慢变冷1、转化某一基因型细胞从周围介质中吸收另一基因型细胞的DNA,而使其基因型和表型发生相应变化的现象。2、转染除去蛋白质外壳的病
6、毒核酸感染细胞或原生质体的过程。3、转导用噬菌体做载体,将一个细胞的基因传递给另一个细胞的过程。4、显微注射基因工程步骤三--将重组的DNA分子引入合适的宿主细胞内从大量携带重组体DNA分子的宿主细胞中分离出携带目的基因的细胞。基因工程步骤四--选择、筛选1、遗传学方法对于带有抗药性基因的质粒,可通过检测受体菌是否由敏感状态变成抗药状态进行筛选。筛选方法2、核酸杂交法筛选方法硝酸纤维薄膜与探针杂交薄膜放射自显影胶片选择所需克隆3、免疫学方法用特异性抗体检测基因产物从而筛选阳性克隆的方法。筛选方法看新基因能否在新细胞中定居下来,能否复制自己稳定传代,能不能产生表达作用,
7、指导蛋白的合成。基因工程步骤五--培养,观察DNA重组体的构建与克隆固氮基因的应用抗卡那霉素基因的应用基因工程产品介绍:生长激素人胰岛素疾病诊断基因工程的成果二、细胞工程定义:将一种生物细胞中携带全套遗传信息的基因或染色体整个地转入另一种生物细胞,从而改变细胞的遗传性,改造生物的性状和功能,创造新的生物类型。它包括细胞融合、细胞器移植、染色体工程、细胞和组培技术等。通过生物学、化学或物理学的方法,使两个不同种类的体细胞融合在一起,从而产生具有两个亲本遗传性状的新细胞。童鱼——世界上第一条没有父母的鱼:“鲫鲤核质杂交鱼”体细胞杂交/细胞融合技术组织
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