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时间:2019-05-10
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1、水的细菌学检查---细菌总数的测定目的要求通过实验掌握水样的采集和水样中细菌总数测定的方法。实验原理生活用水的水源常被生活污水、工业废水以及人畜粪便所污染。腐生性微生物对人无害,而病原性微生物则能引起传染病甚至流行病,如霍乱、伤寒、细菌性痢疾和阿米巴性痢疾以及脊髓灰质炎和传染性肝炎等病毒性疾病。1、水中细菌总数的测定水中的细菌总数越多,说明水中有机物的含量就越高,水体被有机物污染的程度越重。水中细菌的种属繁多,以一定的培养基平板上生长出来的菌落,计算出来的水中的细菌的总数实际上是一种近似值。绝大多数腐生性和致病性的细菌,可在肉膏蛋白胨培养基上进行生长。因此应用平板菌落计数技术来测定水样中的细
2、菌总数基本上能代表水样中细菌的数量。如何测定水样是否合乎饮用标准?水中细菌总数的测定和计算在肉膏蛋白胨培养基上,1ml水样,经37℃,24h培养后所生长出来的总菌数。我国饮用水的卫生学指标:在1ml自来水中细菌总数不得超过100个。器材培养基:肉膏蛋白胨琼脂培养基;灭菌水其他用具:灭菌三角瓶,灭菌培养皿,灭菌试管等操作步骤1、水样的采取(1)自来水:水龙头火焰灼烧3min,再开放水龙头流水5min后,以灭菌三角瓶接取水样(2)湖水:取距水面10-15cm的深层水样,最好立即实验,否则放入冰箱中保存。2、细菌总数测定(1)自来水A、用灭菌管吸取1ml水样,注入灭菌培养皿中,做两个皿。B、分别倾
3、入约15ml已溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基,在桌上作平面旋摇,使水样与培养基充分混匀。C、另取一空的灭菌培养皿,倾入约15ml肉膏蛋白胨琼脂培养基,作空白对照。D、培养基凝固后,倒置于37℃中,培养24h,进行菌落计数。(2)湖水A、稀释水样:a、取3个灭菌空试管,分别加入9ml灭菌水。b、取1ml水样注入第一管9ml灭菌水内、摇匀。c、再自第一管取1ml至下一管灭菌水内,如此稀释到第三管,稀释度分别为10-1,10-2,10-3。B、自三个稀释度的试管中各取1ml稀释水加入空的灭菌培养皿中,每一稀释度做两个培养皿。C、各倾入约15ml已溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂
4、培养基,在桌上作平面旋摇,使水样与培养基充分混匀。D、培养基凝固后,倒置于37℃中,培养24h,进行菌落计数菌落计数1、自来水:两个平板的平均菌落数即为1ml水样的细菌总数。2、湖水:(1)先计算相同稀释度的平均菌落数。若其中一个平板有较大片状菌苔生长时,则不应采用,而应以无片状菌苔生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌苔的大小不到平板的1/2,而其余的一半菌落分布又很均匀时,则可将此一半的菌落数乘2以代表全平板的菌落数。(2)首先选择平均菌落数在30-300之间的,当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时,则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样的细菌总数,见例1。例次不同稀释度的平均
5、菌落数两个稀释度菌落数之比菌落总数(个/ml)10-110-210-31136516420——16400或1.6×10422760295461.637750或3.8×10432890271602.227100或2.7×1044无法计数1650513——513000或5.1×105527115——270或2.7×1026无法计数30512——30500或3.1×104(3)若有两个稀释度的平均菌落数均在30-300之间,则按两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2,采取两者的平均值,若大于2,则取其中较小的菌落总数,见例2和例3。例次不同稀释度的平均菌落数两个稀释度菌落数之比菌落总数(个/ml
6、)10-110-210-31136516420——16400或1.6×10422760295461.637750或3.8×10432890271602.227100或2.7×1044无法计数1650513——513000或5.1×105527115——270或2.7×1026无法计数30512——30500或3.1×104(4)若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数,见例4。例次不同稀释度的平均菌落数两个稀释度菌落数之比菌落总数(个/ml)10-110-210-31136516420——16400或1.6×10422760295461.637750或3
7、.8×10432890271602.227100或2.7×1044无法计数1650513——513000或5.1×105527115——270或2.7×1026无法计数30512——30500或3.1×104(5)若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数,见例5。例次不同稀释度的平均菌落数两个稀释度菌落数之比菌落总数(个/ml)10-110-210-31136516420—
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