实验11染色体分带技术

实验11染色体分带技术

ID:36866413

大小:2.74 MB

页数:16页

时间:2019-05-10

实验11染色体分带技术_第1页
实验11染色体分带技术_第2页
实验11染色体分带技术_第3页
实验11染色体分带技术_第4页
实验11染色体分带技术_第5页
资源描述:

《实验11染色体分带技术》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在教育资源-天天文库

1、实验11染色体分带技术一、实验目的了解染色体分带技术的原理及应用了解染色体G带和C带显示的原理掌握染色体G带和C带显色技术流程2021/9/61二、实验原理人们用物理、化学因素处理后,再用染料对染色体进行分化染色,使每条染色体上出现明暗相间,或深浅不同带纹的技术称为显带技术(bandingtechnique)。染色带的数目、部位、宽窄和着色深浅均具有相对稳定性,所以每一条染色体都有固定的分带模式,即称带型。染色体带型是鉴别染色体的重要依据。2021/9/62二、实验原理G带是将处于分裂中期的细胞经胰酶或碱、热、尿素等处理后,再经吉姆萨染料染色后所呈现的区带,是目

2、前被广泛应用的一种带型。其特性是显带方法简单恒定,带型稳定,保存时间长。一般认为,易着色的阳性带为含有AT多的染色体节段,在间期核呈固缩状态,而且是DNA晚复制区之一,有相当一部分中度重复序列DNA可能在G带区;相反,含GC多的染色体段则不易着色。也有人认为,Giemsa染料在G带区是与DNA结合,而且与结合DNA的染色质非组蛋白有关。总的来说,G显带的机制还未搞清。C带是染色体标本经强碱(NaOH或Ba(OH)2)热处理后,在着丝粒周围区域和异染色质区经Giemsa染成深色,而染色体两臂的常染色质部分仅有浅淡轮廓。这是一种染色体上不显示带纹的特殊显带法,主要显

3、示着丝粒区和异染色质区的变化。2021/9/63二、实验原理双翅目昆虫(果蝇、摇蚊等)幼虫期的唾腺细胞很大,其核内的染色体称为唾腺染色体。由于它们比普通染色体大100-150倍,宽约5μm,长约400μm,因而也称为巨大染色体。另外唾腺染色体经多次复制而不分开,所以又称作多线染色体。唾腺染色体经染色后出现深浅不同,疏密有别的横纹,且其数目和位置常常是恒定的,标志着物种的特征。2021/9/64三、实验仪器材料洋葱、蚕豆、大蒜根尖果蝇唾腺1NHCl溶液Ba(OH)2溶液Giemsa染液显微镜2021/9/65四、实验步骤2021/9/66四、实验步骤2021/9/

4、67唾腺呈半透明,球棒状,前端较细,后端粗钝,有时成对粘在一起成“V”字型,其外侧有时附有乳白或淡黄色的脂肪,此时应保留唾腺形态的完整,因为食道和肠管也是半透明的,如果唾腺不完整,就很难判断唾腺和肠道的取弃。四、实验步骤2021/9/68果蝇唾腺染色体制片把唾腺剔出移到玻片的干净处,并清除其余器官和组织。如果唾腺上附有脂肪,应把乳白色或淡黄色的脂肪清除干净,保留半透明的唾腺。把多余的生理盐水用吸水纸吸干,加一滴1N盐酸;室温下水解2分钟,然后吸干。空气干燥一周四、实验步骤2021/9/69植物根尖染色体制片前处理:根尖用0.1%秋水仙素溶液处理4~12小时。固定

5、:用水洗净处理过的根尖,经Carnoy固定液固定2-24小时,换入70%酒精保存。解离:取出根尖,用蒸馏水洗净,放入1NHCl中60℃解离8~10min,再用蒸馏水洗净。低渗:倒去酶液,用蒸馏水慢慢冲洗2次,然后在蒸馏水中浸泡30min。后固定:取出材料于载片,滴加新鲜Carnoy固定液,固定10-30min涂片:用镊子将材料捣碎,边捣边加固定液,去掉大块残渣。空气干燥一周四、实验步骤2021/9/610G带显色(1)将制好的染色体标本,置72℃~75℃烤箱中烤片3h。(2)放入预温至37℃的0.025%胰酶溶液中(pH=7.2~7.4)消化1min左右,每次的

6、作用时间并不完全相同,可先试一张片子,再根据显带效果调整胰酶作用时间。(3)在Giemsa染液中染色10min,自来水冲洗干净,晾干后,即可阅片。(4)镜检:在显微镜高倍目镜下检查显带标本,在染色体上若出现清晰的深浅相间的带型,即为可取标本,可供摄像分析四、实验步骤2021/9/611四、实验步骤1.制片、烤片同G显带技术(65℃,2小时)。2.染色体标本在室温下用0.1NHCl水解15分钟后蒸馏水冲洗。3.2%Ba(OH)2,65℃处理10分钟后蒸馏水冲洗。4.2×SSC,65℃处理1小时。5.冲洗冷却后用1:10Giemsa稀释液染色7分钟。6.冲洗后晾干,

7、镜检。C带显色2021/9/612五、实验结果G带显色2021/9/613五、实验结果C带显色2021/9/614唾腺染色体显色五、实验结果2021/9/615六、思考题染色体显带有哪些技术?染色体显G带的关键步骤是什么?染色体显C带的关键步骤是什么?2021/9/616

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文

此文档下载收益归作者所有

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文
温馨提示:
1. 部分包含数学公式或PPT动画的文件,查看预览时可能会显示错乱或异常,文件下载后无此问题,请放心下载。
2. 本文档由用户上传,版权归属用户,天天文库负责整理代发布。如果您对本文档版权有争议请及时联系客服。
3. 下载前请仔细阅读文档内容,确认文档内容符合您的需求后进行下载,若出现内容与标题不符可向本站投诉处理。
4. 下载文档时可能由于网络波动等原因无法下载或下载错误,付费完成后未能成功下载的用户请联系客服处理。