白桃中沙门氏菌、霉菌检测方法研究

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1、摘要沙fJ氏菌可以通过污水、肥料等多种方式污染水果，进而对人体健康造成危害。本文针对其属特异性基因／nvA所设计的引物进行PCR检测，通过对DNA提取方法、引物浓度、退火温度及循环数等方面进行优化实验确定最佳反应体系及反应程序，未经增菌检测限可达到103cfu／ml。结果还表明，经过10h增菌及调节pH7．0等样品处理后，向桃中存在的背景微生物、死菌以及样品基质等均对PCR法检测沙门氏菌没有太大影响。霉菌及酵母菌常常引起水果的腐烂变质，同时对人体健康造成危害。本文对3M纸片法和国标法检测霉菌和酵母菌进行比较，结果表明，无论是真菌标准菌株

2、菌悬液或白桃样品的两种方法计数结果均无显著差异，且线性相关关系显著，即两种方法在白桃中霉菌和酵母菌计数结果上有较好的一致性。同时建议使用3M纸片法或国标法时，选择菌落数在25．100之间的纸片或平皿进行自桃中真菌计数，并且建议水果卫生指标对新鲜自桃限定霉菌和酵母菌计数小于104cfu／g。从白桃中分离鉴定出16株共6个属的霉菌，均属于半知菌类，其中有丛梗孢目的交链孢霉属、葡萄状穗霉属、丛梗孢属、青霉属和穗霉属，以及少数不产孢的无孢菌群的丝核菌属。为进一步研究病原菌的致病力、侵染途径和侵染规律等奠定了基础。关键词：自桃，沙门氏菌，霉菌，酵

3、母菌AbstractContaminationfromsurfacerun-offwater,compostingfarmmanureandthelikecouldbesourcesofSalmonellaspp．thatcontaminatefruits．Apairofprimersdesignedaccordingto／nvAgenetoconductPCRdetectionshowedgoodselectivity．TheoptimumPCRconditionswereoptimizedthroughDNAextraction，p

4、rimerconcanIration，annealingtemperatureandnumberofcycles．Andthedetectionlimitwas103cfu／mlbeforeincubation．Afterincubationfor10handadjustingpH7．0ofpeachsample，backgroundmicroorganisms，deadcellsandfoodmatrixdidnothavebiginfluenceonPCRdetectionof＆lmonellaspp．inwhithpeach．Mo

5、ldsandyeastswerethemainreasonofspoilageoffreshfruitsandwereharmtohumanhealth．ThedetectionresultofmoldsandyeastsbothinfungicultureandpeachbyGBmethodand3MPetrifilmmethodwerecomparedinthispaper．Theresultshowedthat：therewasnosignificantdifference(P>0．05)betweenthetwomethodsa

6、nd900dcorrelationcoefficientswereobservedbetweenthem．Therefore，thetwomethodswereessentiallyequivalent．Coloniesbetween25and100wererecommendedtocountmoldsandyeastsinpeachandthenumberoflessthan10"cfu／gwasrecommendedtolimitmoldsandyeastscountsinfreshpeach．Sixgeneticfrom16iso

7、latesofmoldswereisolatedandidentified，includingAlternariaspp．，Memnoniellaspp．，Moniliaspp．，Penicilliumspp．，Spicariaspp．andRhizoctoniaspp．，whichsuggestedatheoreticalbasisfurfurtherstudyonthepathogeniccapability,infectionprocessandinfectionrules．Keywords：whitepeach，Salmonel

8、lasp．，mold，yeastIIAoACBPWcfuCI：蛆DNAdNTPEBl珂VgeneMRLNa21既)TAPBSPCAPCRPnARBCr／minSDSTa1AEThnisTSB缩略词Abbre