急性酒精摄入对大鼠肝窦内皮细胞窗孔及肝细胞间紧密连接的影响

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1、·英文缩略词·7中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：型11翌强日期：2墨：』：!艺中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国

2、医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：指导教师签名：日期：·中文论著摘要·急性酒精摄入对大鼠肝窦内皮细胞窗孔及肝细胞间紧密连接的影响刖再酒精性肝病(AlcoholicLiverDisease，ALD)是长期大量酒精摄入所导致的肝脏病变，是西方国家最常见的肝硬化病因，也是十大常见死因之一。ALD包括轻度酒精性肝损伤、

3、酒精性脂肪肝、急性酒精性肝炎和酒精性肝硬化等。我国ALD的诊断标准中将酒精引起的肝损害分为急性和慢性损害，即每日饮酒量超过409持续5年以上可造成慢性肝损伤，而2周内有大量饮酒史，折合酒精：量>809／d时即可发生急性酒精性脂肪肝。参与前者形成的肝脏组织学改变涵盖了所有肝脏组织细胞(包括肝细胞、星状细胞和肝窦内皮细胞等)、细胞因子(包括PDGF、TNF．alpha等)和细胞外基质(MMP和TIMP等)，研究也比较深入，有些机制已经逐渐明确。但对急性ALD组织学改变的研究较少，而酒精性脂肪肝出现又最早。后者的形成与肝脏组织细胞、细胞因子和细胞外基质的关系并不十分清楚，急性酒精摄入对肝窦内皮细

4、胞(LiverSinusoidsEndothelialCell，LSEC)及肝细胞间紧密连接的研究更少。本研究通过建立急性酒精性肝损害大鼠模型，观察大鼠肝窦内皮细胞窗孔的改变及对肝细胞间紧密连接的影响，进一步探讨急性酒精性肝损害的发生机制。实验方法一、急性酒精性肝损害动物模型的制备雄性Wistar大鼠20只，体重190．2209，随机分为酒精组和对照组，每组10只，灌胃前禁食12h。酒精组给予400ml／L乙醇59·kgd／次，每12h灌胃1次，共3次；对照组给予生理盐水2．0ml／只，每12h灌胃1次，共3次。二、肝脏组织病理学检测在最后一次灌胃后4h分别麻醉两组大鼠。l、固定的肝组织经

5、梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，连续切片5lam进行HE染色，光镜下观察肝脏组织病理学的改变。2、另取新鲜肝组织固定、脱水、环氧树脂包埋，用钻石刀切成50nto薄片，然后经醋酸双氧铀和柠檬酸盐双重染色，电镜下观察肝脏组织超微结构的改变，包括肝窦内皮细胞窗孔和肝细胞间的连接。实验结果一、实验动物的一般状况正常组大鼠行动灵活，反应如常。酒精组2只大鼠于灌胃后出现行动迟缓，反应迟钝；1只大鼠出现竖毛，易激惹，间断出现精神躁狂，抽搐，癫痫样发作；在造模过程中酒精组有3只大鼠死亡。二、肝脏一般组织病理学检测对照组肝脏组织结构完整，细胞索以中央静脉为中心向四周呈放射状整齐排列，肝小叶轮廓清晰，肝细

6、胞呈多边形，细胞分界清，核圆而清晰，位于细胞中央，细胞质丰富。酒精组肝窦扩张，肝细胞肿胀，细胞质疏松，细胞质内可见大小不等、数量不一的圆形脂肪空泡，散在肝细胞嗜酸性变，小叶中央静脉周围和汇管区有少量炎细胞浸润。三、电镜下肝脏组织病理学检查对照组血窦和狄氏间隙大小正常，肝窦内皮细胞扁平，有许多大小不等的窗孔(直径一般约在132．159nm)，窗孔无隔膜，胞质内有大量吞饮小泡，内皮下无基膜。在所有标本中均可见肝细胞间紧密连接，并且其层次清楚、光滑，走行自然。酒精组肝窦内皮细胞轻度增生，窗孔数量减少、直径增大(窗孔直径扩大在约在163．212rim)。2只大鼠出现窗孔断裂。5只(4／7)大鼠肝细

7、胞间紧密连接模2糊，层次不清楚，走行略僵硬。1只(1／7)出现紧密连接的断裂、走行僵硬。1只(i／7)大鼠标本中未见紧密连接结构，仅见细胞间隙增宽。结论1、在急性酒精性肝损害大鼠模型中，肝窦内皮细胞轻度增生，窗孔数量减少，直径增大。甚至有的窗孑L出现断裂。2、在急性酒精性肝损害时部分大鼠肝细胞间紧密连接数量减少，甚至模糊不清，层次改变，部分有断裂和走行僵硬。关键词急性酒精性肝损害；肝窦内皮细胞；紧密连接；大鼠3·英文论著