动物细胞培养在科研生产中的应用

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1、动物细胞培养在科研、生产中的应用一、动物细胞培养在科研中的应用POLD1基因表达受到抑制后对MCF-7细胞的生长及周期的影响¢Trizol提取MCF-7细胞总RNA¢反义POLD1表达重组质粒pXJ41-as-POLD1的构建及鉴定¢细胞转染及稳定表达细胞株的筛选¢细胞生长曲线实验¢血清依赖性实验¢单细胞克隆形成实验¢软琼脂集落形成实验¢胸腺嘧啶核苷（TdR）双阻断法同步化MCF-7细胞¢流式细胞光度术（FCM）进行细胞周期分析¢Westernblot鉴定转染细胞中特异性蛋白的表达论文题目：中心体蛋白centrin在人胚胃上

2、皮细胞GES1的细胞增殖和癌化中的作用答辩人：陈娴指导导师：王永潮教授实验方法¢构建反义重组质粒¢转染细胞并筛选细胞株¢半定量RT-PCR（semiRT-PCR）¢细胞生长活性测定细胞生长曲线测定血清依赖性实验平板集落形成率测定软琼脂集落形成比较¢流式细胞光度术（FCM）分析细胞周期¢细胞间接免疫荧光实验（IEF）¢免疫印迹实验（westernblot）细胞转染及稳定表达细胞株的筛选¢GES1细胞G418筛选浓度的选择（300ug/ml）¢稳定表达细胞株的筛选GAC1GAC3细胞生长曲线的测定0.80.70.60.5GES1

3、0.4GAC1OD5700.3GAC30.20.1012345678910时间（天）返回血清依赖性试验结果0.50.450.40.35GES110%0.3GES10.5%0.25GAC10.5%OD5700.2GAC30.5%0.150.10.0501234567时间（天）平板集落形成率的比较平板集落形成率的比较605048.347.34031.53020细胞克隆数（个）100返回GES1GAC1GAC3软琼脂集落形成比较GES1BG823GAC1GAC3返回GES1表现的正常细胞分裂周期GAC3分裂期细胞返回一个新的细胞周

4、期相关蛋白ICF45基因克隆及其功能研究CloneandcharacterizationofanovelcytoplasmproteinICF45,involvedincellcycleregulation答辩人：郭德良导师：何大澄教授ICF45ResearchòFull-lengthcDNA克隆及其生物信息学分析òICF45mRNA在不同组织中表达分析òICF45蛋白表达分析òICF45亚细胞定位研究ò利用RNAi研究ICF45细胞内功能第五部分利用RNAi研究ICF45细胞内功能1.稳定沉默ICF45基因表达的克隆细胞株

5、建立2．细胞形态和核变化观察3.细胞生长和增殖能力4.细胞周期和DNA含量变化5．细胞凋亡率6．p53表达7.Centrosomeandspindle8.微丝形态变化二、动物细胞培养在生产中的应用中国预防医学科学院病毒所1998年遗传免疫室工作年会报告题目序号题目时间（分）报告人15高效表达乙肝表面抗原转基因细胞系的构建及细胞系的10杨芙蓉生长特性的研究张陵林16篮式生物反应器灌流培养工艺的研究10宗芳王文17乙肝SS1融合蛋白纯化工艺的研究10陈红18高效表达细胞株的内外源污染因子的检查10阮薇琴19CHO细胞基因表达中不

6、同扩增系统（GS及dhfr）比较的研究10王志云※研究生开题报告1.HPV16治疗性疫苗的研制（博士）10骆卫锋2CpG对重组活疫苗免疫效果影响的研究（博士）10许洪林3EB病毒膜抗原基因工程疫苗的构建及其免疫效果的研究（博士）10魏滨4CpG对基因工程乙肝疫苗免疫效果影响的研究（硕士）10王四清※阮力做全室工作总结1999年遗传免疫室工作年会报告题目序号题目时间（分）报告人1.表达PreS1的CHO细胞中试培养工艺研究10’杨芙蓉2.含PreS1的新型乙肝疫苗中试纯化工艺的研究10’李军3.含乙肝表面抗原S2SS1基因的质

7、粒构建10’王秀平4.表达PreS1的CHO细胞致瘤性实验及新细胞系筛选10’阮薇琴•研究生开题报告1优势密码子对病毒基因表达调控影响的研究10’王世峰2CHO细胞优势密码子与外源基因表达关系的研究10’王志云•全室工作总结10’阮力小鼠金属硫蛋白基因-I在CHO细胞中稳定表达及其在医疗方面的应用殷慎敏李令媛茹炳根(北京大学生命科学学院生物化学及分子生物学系，北京，100871)摘要：将小鼠的MT-I基因插入pSV2-dhfr质粒的EcoRI位点,构建了具有SV40和MT双启动子并正向插入MT-I基因的表达载体。用改良的磷酸

8、钙/DNA沉淀法将表达载体导入CHO-dhfr-细胞内，用不含次黄嘌呤(H)和胸腺嘧啶(T)的选择培养基筛选出稳定表达MT阳性克隆D-22，经检测10~6细胞的MT表达量约为1.8μg，D-22细胞对Cd2+浓度抗性较之CHO-dhfr-细胞高14倍。为了研究金属硫蛋白对正常细胞所具有的保