水稻WRKY10基因的功能研究

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1、浙江大学博士学位论文水稻WRKY10基因的功能研究姓名：谢科申请学位级别：博士专业：植物病理学指导教师：郭泽建20050501单位代码：Y732802研究生学号：10116051水稻WRKYIO基因的功能研究论文评阙人答辩委员会主席答辩委员会成员壶墨拯麴坠论文答辩日期至QQ§箜§月致谢本论文是在导师郭泽建教授的悉心柏导下完或的。从论文的选题．设计，方案的瑚定实施到研完结善萌分新整理以反论文的撰写．无不凝结着导师的心血与智慧。导师渊博的知识、开拓创靳的学者风范．严谨求实的诒学作风、宽容豁迭的处世忐度，对斜学研究的执着连求和敬业精神．时

2、锏激励着我并将使我受益终身。教诲谆谆，师恩难惠，在此，谨向导师致以崇高婚敬意和衷心略感谢，惑镶晰弘支学生物技术研究所柳实验室帏兄弟姐蛛们以反中国表业土学埴保棱328实验室师弟坪昧们的无私帮助。特别感谢吴学龙、吴坤陆、王海昝三位同学f我们瞬人从华家池畔翻百望山下一路同行，工作上互帮互助，生活上彼此关心，结下了睬厚情谊，李靖，阚素超，程志强．蒋冬花，李南羿、刘士旺．窦彩虹，陈旭君．齐高燕、王挂英、郝中蜱、踯互文、拐波、白淳、赵佩欧、张辐、张国静，郑志民，王思勉，访文宇，郝馒杰．到东风．李毅、豢乐、王晓娜，王晓晖等同学．也郁恰予许，的帮助

3、．在此一并感谢，感谢浙江文学生物技术碍究所许多老掉和同学的煎情帮助和支持。感谢梁五生老师在学习和生活寸恰予的关心和帮助。或谢我曲同学及好友驶晓明．施积夫，许敏．尚玉磊．崔晓峰在学习和生活上给予皓关心和帮助。我在中国农业土学逆行博士螺置曲碍宪期同．得到农业郜植物病理分子生物学重点实验室许多老师和同学皓煞惜帮助和支糟．特剥感谢彭友袅教授、赶文生老师在各方面岔予的拍导和帮助。感谢媛实验室博士生李茂竿．张连洪．霹敏峰，孟祥兵、酋瑞明、汪敏、用涛等同学在实骚中静予的许多帮助。感谢中国水稻所孙宗修研霓聂提供的实赫材料和对我课题辫览曲拍导?感谢中

4、国科学院遗传与式育研究所王遘文婵宪更在蛋白王细慈定饿实骚中提供技术支特和指导?感谢晰江省农斜院蛙保辑亲荣耀粥雒宪受在稻痰蕾接种实验的帮助，感谢我的父亲母亲对我曲培拳和教言，感谢我曲椿诛对我的支持和鼓励，感谢赴丽娜备予我的关心和带助，崴糍在学习、工作．生活中给我帮助婚同学和亲友．对于他们，我无以为报，只有像他们一样去关心和帮助他人、弄努力田报社全。谢科二口口五年五月北京水稻WRKYIO基因的功能研究摘要WRKY蛋白主要存在于植物中，构成转录因子超家族。其成员在相当广泛的范围内参与了植物的生长发育、代谢以及对生物或非生物胁追的反应。本研

5、究从水稻cDNA中分离了Ob职翩0口基因，并对其不同的剪接方式、编码蛋白的生化功能、表达模式进行了分析，并就其在植物体内的功能进行了讨论。OsWRKYl0基因编码含一个WRKY保守域、锌指模式为CX4CX23HXH的蛋白，属予WRKYIb亚组。OsWRKYl0与其它WRKY成员的同源性低，表明分离的Os∥RKlll0是WRKY基因家族的新成员。OsWRKYl0选择性剪接产生两个转录本，命名为朋Ⅸ¨O和脓翮0D-2，分别编码一个379氨基酸、分子量39．9kDa的蛋白质和一个270氨基酸、分子量28．8kDa的蛋白质。对OsWRKYl

6、0进行了原核表达和纯化，凝胶阻滞结果表明，OsWRKYlO能与W盒元件特异结合。构建了踟i：：伪胀KW仉G胛载体，甩基因枪轰击法将载体啪正蕊脚翩协G．FP载体和对照载体Ubi：：GFP载体导入洋葱表皮细胞中进行亚细胞定位研究。结果表明osWRKYlO与GFP的融合蛋白出现在细胞核，而对照GFP扩散于整个细胞内，说明OsWRKYl0定位予细胞核。因此，OsWRKYl0具有大多数WRKY蛋白所共有的特征。将OsWRKYIO基因2个转录本的完整编码序列和全长转录本的不同缺失序列片断与酵母GAL4BD序列融合，采用酵母单杂交的方法分析了Os

7、WRKYl0的转录激活活性和转录激活域。结果表明，2个转录本郁具有转录激活活性，N端第61～120位氨基酸的区域是转录激活域。Northern分析表明，OsWRKYIO在报、茎、时和花中都有表达，且受发育阶段的调节。荣莉酸、乙烯利、赤霉素处理和枫械伤害、冷(4。C)处理水稻，OsWRKYIO表达无明显变化，但脱落酸处理、赫胁遣和水分胁迫则明显抑制OsWRKYIO的表达，提示该基因可能参与植物对渗透胁迫和盐胁迫的反应，丽脱落酸可能介导了这种反应。关键词：水稻，WRKY，转录因子，基因克隆，选择性剪接Functionalanalysis

8、ofriceWRKYl0geneAbstractTheWRKYproteins，mainlypresentinplants，constituteasuperfamilyoftranscriptionfactors．Theyareext