Dahl高血压大鼠睾丸组织NOS及相关因素研究

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1、中文摘要DahI高血压大鼠睾丸组织NOS及相关因素的研究擅要目的：(众所周知，高血压会对全身各个系统造成不同程度的影响。对高血压大鼠的研究发现，随着血压升高，大鼠睾丸生精上皮会出现异常变化，重者可影响生育能力。俸实验拟应用光镜、免疫组织化学、细胞培养等方法研究诱导型一氧化氮合酶、内皮型一氧化氮合酶及内皮素在Dahl型高血压大鼠睾丸中表达的变化，以明确NO与高血压、生精功能、雄激素分泌及内皮功能的关系。为阐明高血压导致生精功能障碍的机理奠定基础。(背景：NOS是NO合成的关键酶，以原生型和诱生型两种形式存在。原生型NOS包括存在于神经细胞中的nN

2、OS和存在于内皮细胞中的eNOS，诱生型NOS即iNOS。它们广泛存在于多种细胞中。NOS催化产生NO，NO具有多种生物学功能。L一精氨酸—-NO途径与高血压和多种心血管疾病有关。一般认为，高血压时血管内皮功能障碍，NO合成不足，使血管扩张作用受阻，周围血管阻力增加，这是高血压时的特征性表现。而且NO生物学作用具有双重性，低浓度的NO促进细胞生长，而高浓度NO则抑制细胞生长。生殖学家们发现N0在生殖系统中的作用亦是如此，低浓度的NO能在生殖的不同阶段对生育活动进行调节，如介导阴茎勃起，参与精子发生，获能并影响精子质量等。但睾丸中的NO过量中文摘

3、要产生也会使正常组织受到损害，如减少睾丸的血供，影响雄激素分泌，损害生精过程，抑制精子运动度等。ET是由体内几乎所有的组织细胞生成的缩血管活性因子，它在睾丸中也有分布，ET可以调节睾丸的血流量、调节曲细精管的收缩和精子的运输及参与雄激素的分泌。近来我室对Dahl高血压大鼠的研究发现其血清中NO，ET明显升高。因此，探讨高血压大鼠睾丸组织中NOS及ET的变化对阐明高血压导致的雄性生精功能障碍的机制具有重要意义。材料和方法：引进日本SEAK吉富会社Dahl盐敏感大鼠饲养于河北医科大学组胚教研室动物室中，自由摄水，饮食，近亲(兄妹)交配，其纯合子后代

4、对盐敏感是研究高血压的良好动物模型。选取雄性大鼠，生后5周起开始喂以8％高盐饲料，分别选取喂盐后4、5、6、7、8周的大鼠及相应年龄段的正常饮食大鼠每组6只，4％多聚甲醛灌流固定，取双侧睾丸，固定。常规石蜡包埋切片，然后进行光镜及免疫组织化学ABC法研究。选取正常18—20天龄雄性正常饮食大鼠及DAHL盐敏感大鼠各6只，在无菌环境下，取睾丸，经胰酶，胶原酶消化后，分离得到Sertoli细胞，将细胞接种子培养基中培养传代，4代后进行免疫组化染色。取睾丸动脉血，用放射免疫法测定血清睾酮水平。结果；免疫组织化学结果如下：在正常及高血压大鼠睾丸组织中，

5、免疫阳性产物位于细胞浆通常呈颗粒状。①在正常大鼠睾丸中，免疫阳性细胞包括管周细胞、中文摘要Leydig细胞、Sertoli细胞及部分精子头部。在高血压大鼠睾丸组织中，iNOS免疫阳性产物位于管周细胞，Leydig细胞、Sertoli细胞和部分生精细胞，且阳性细胞增多，而且表达增强(P<0．01)。随着高血压的进展，iNOS的表达呈下降趋势(P<0．01)。但其表达始终高于对照组正常大鼠。②正常大鼠睾丸的部分Sertoli细胞、Leydig细胞、管周肌样细胞、间质中的大血管内皮细胞对eNOS呈免疫阳性反应。高血压大鼠睾丸中，除上述几种细胞外，高血

6、压后期部分生精细胞和精子也呈eNOS免疫反应阳性。其细胞阳性率明显高于正常大鼠(P<0．01)。并且eNOS在高血压大鼠睾丸组织中的表达呈逐渐增高的趋势(P<0．01)。③正常大鼠睾丸中ET免疫阳性产物主要位于血管内皮细胞，在Leydig细胞，Sertoli细胞中也有表达。高血压大鼠睾丸中ET免疫阳性细胞为Leydig细胞、Sertoli细胞和管周肌样细胞，睾丸间质中的部分血管内皮细胞可见阳性反应。实验组ET表达逐渐增高，其各年龄段阳性率均高于对照组(P

7、、eNOS均在细胞质中表达，正常及高血压大鼠的部分Sertoli细胞对iNOS呈阳性反应，但表达量较少，细胞对eNOS有较强的表达。两种物质的表达量在正常及高血压大鼠中无的明显差异(P>0．05)。睾丸动脉中睾酮水平随血压升高而减少(P

8、g细胞中，正常生精细胞中无eNOS表达。在高血压大鼠睾丸eNOS除定位于Sertoli和leydig细胞外，高血压后期部分生精细胞和曲细精管中的精子也