AHI1蛋白与摄食行为关系的研究

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1、IlIIII大学硕Ij学位论文AIll1蛋白Lj掇食行为关系的研究AHll蛋白与摄食行为关系的研究专业：内科学内分泌硕士生：牛少娜导师：杨川I副教授中文摘要肥胖是一种严重的慢性疾病，是诱发2型糖尿病、高血压病、冠心病、中风、血脂代谢异常和多种肿瘤的重要原因。大量的研究表明，当能量摄入超过能量消耗数年即可产牛肥胖，肥胖与摄食增加密切相关，摄食的增加又与神经内分泌密切相关。中枢神经系统的神经通路在调控能量平衡中起着关键的作用。中枢能量感受机制的破坏是产生肥胖的重要原因。而这些中枢神经系统的调节作用离不开神经肽和神经递质的

2、作用。彳删(Abelsonintergmtionsite1)最初由加拿大学者于1988年发现，是一种与小鼠淋巴瘤和白血病相关的致癌基因。AHll基因突变会导致JoubertSyndrome(常染色体隐性遗传神经发育障碍)。彳删编码的蛋白(AHIl蛋白)包含七个重复的WD40结构域和一个SH3结构域以及一个N端卷曲螺旋，可在蛋白与蛋白相互作用以及信号转导中起重要的相互作用。AHll蛋白在下丘脑摄食相关核团腹内侧核(VMH)、室旁核(PVN)、弓状核(ARC)、外侧核(LH)，脑干的孤束核(NTS)等能量调节中枢表达丰富

3、，为小脑和脑干的发育所必需。最近一个研究发现在荷兰的2型糖尿病人群中，AHll基因的突变与体重指数具有明显相关。5．HT是目前摄食相关神经递质中研究较多的一种，研究发现5-HT通过5-HT2cR作用于下丘脑弓状核的POMC神经元，促进其释放大量的Q—MSH，从而作用于下游的MC4R，以减少摄食。研究发现5一HT2cR也主要分布于下丘脑的摄食相关核团腹内侧核(VMH)、室旁核(PVN)、脑干的孤束核(NTS)、皮层以及杏仁核等；而且与AHIl蛋白的组织分布和胞内定位非常相似：都呈stigmoid}JlII大学硕lj学位

4、论文AHI1蛋白与摄食行为关系的研究body(小点状)样聚集于神经元的胞体部位。而尽管在5．HT系统调节能量平衡方面已经有重要的研究发现，但足仍然有一些问题还未解决。比如：一些证据表明，仍有一些其他的细胞和信号分子与5．HT-POMC系统相瓦作用，并通过影响这个信号通路调节能量平衡。由此我们推测AHIl蛋白可能对摄食行为具有调节作用；而且这种作用可能与5一HT2cR有关。研究目的1．AHIl蛋白和摄食的关系；2．AHII蛋白与5-HT2cR之问的关系。材料与方法1．建立食欲增加的动物模型1．1饥饿动物模型30只8周龄

5、雄性C57BL／6J小鼠，分三组，分别饥饿48h，24h，Oh，期间可自由饮水。处死取下丘脑。Westernblotting和Real—TimePCR检测AHIl的变化。1．22-DG腹腔注射造成的饥饿模型20只8周龄雄性C57BL／6J小鼠，分为2组，2-DG组2-DG(250mg／kginsaline，ip)，对照组注射生理盐水；2-DG(2．脱氧．D一葡萄糖)是一种碳水化合物代谢选择性阻断剂，注射后小鼠摄食增加，4个小时内作用明显。监测4个小时的摄食量，处死取下丘脑。Westernblotting和Real—T

6、imePCR检测AHII的变化。1．3STZ介导的1型糖尿病模型0．Imol／!的枸橼酸钠和枸橼酸l：l，调至PH值4．5，超净台内过滤，配制STZ溶液。20只8周龄雄性C57BL／6J小鼠，分为2组。一组注射STZ溶液(200mg／kgII一I·III大学硕I：学位论文AHIl蛋n与提食行为关系的研究ip)，另一组注射枸橼酸钠缓冲液。一周内测2次血糖，均超过16．7mol／!即可以认为造模成功。处-夕E取卜‘丘脑。Westernblotting和Real．TimePCR检测AHII的变化。1．42型糖尿病动物模型(

7、db／db小鼠)购买雄性成年db／db小鼠7只。对照组是性别年龄匹配的C57BL／6J小鼠。取5只做westernblotting，2只做免疫组织化学。观测小鼠下丘脑AHIl蛋白的改变，以及小鼠下丘脑各个核团AH!l蛋白量的改变。2．降低下丘脑Attll的表达观察对体重摄食的影响40只8周龄雄性C57BL／6J小鼠用siRNA沉默下丘脑摄食相关核RIVMH等的AHIl表达来改变AHIl的含量，监测一个月小鼠的摄食量、体蕈改变。方法：8％水合氯醛lOO．150mg／kg体重进行动物麻醉，按TheMouseBrain小鼠

8、图谱(200l，1997byACADEMICPRESS)前后．1．1mm，旁开士0．5mm，深度．5．5mm，腺病毒包裹的AHIl特异性shRNA(量10¨pfu／m1)，溶于PBS中，每侧注射l此。用脑立体定位仪及微量迸样器注射入双侧下丘脑腹内侧核内，IOmin注射完，留针2min。对照组注射腺病毒包裹的scramble．shRNA(空载体)