贵州山羊痘的病原学研究和血清学检测

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1、贵州山羊痘的病原学研究和血清学检测摘要：2002年lO月以来贵州省8个地区养羊较为集中乡(镇)相继暴发流行一种全身皮肤、呼吸道、消化道黏膜出现痘疹的高度接触性、发热性的传染病。通过电镜超薄切片观察到皮肤、黏膜痘疹：鸡胚接种观察到绒毛尿囊膜上出现痘斑和感染细胞可见典型痘病毒粒子。绒毛尿囊膜充血、出血、增厚及明显痘斑等病变；感染细胞出现典型的细胞病变，这种病变能被山羊痘参考阳性血清抑制，由此分离出一株山羊痘野生强毒，命名为H—Gz。取痘疹材料接种BHK-21、Vero—E。，经细胞传代增殖培养物感染健康山羊复制出与自然病例相似的症状和病变．细胞培养物经硫酸铵盐析、SephadexG-200层

2、析制各了山羊痘沉淀抗原，这种沉淀抗原能在琼脂扩散反应和对流免疫电泳试验中与山羊痘参考阳性血清、山羊痘免疫血清出现沉淀线，所形成沉淀线能被山羊痘的参考阳性血清特异性抑制，与其他常见的动物病毒病阳性血清不发生交叉反应。采用兔抗山羊痘高免血清提纯抗体，致敏绵羊红细胞建立反向间接血凝(RPHA)试验，开展血清学调查，RPHA阳性检出率为95％。通过检测细胞培养物可见RPHA具有特异性，而RPHA比琼脂扩散试验(AGP)敏感。关键词：山羊痘病毒；电镜观察：细胞病变：动物感染：AGP：RPHA日l『舌山羊痘(goatpox)是由山羊痘病毒属(capripoxvirus)山羊痘病毒(goatDoxvi

3、rus，GPV)引起的一种呈地方流行的高度接触性传染病。本病在世界范围内流行已有很长的历史，一年四季均可发生，但春秋常见，不分性别、年龄、品种。主要分布在北非、中非、印度次大陆和西南亚⋯，特别是养羊业作为重要农业经济结构成分的地区。山羊痘被国际兽疫局(OIE)列为A类重大传染病，1999年中华人民共和国农业部第96号公告将山羊痘列为国家一类动物疫病。近年来，我国的广东Ⅲ、浙江Ⅲ湖南Ⅲ、山东㈨、四川⋯、广西m、贵州Ⅲ、云南㈨、内蒙古⋯1、福建⋯1、江苏n21、河北m1、甘肃⋯3、吉林n51、江西n61、湖北m1、上海‘1“、辽宁m1、黑龙江。”、安徽。o等二十多个省市相继报导山羊痘发生流行

4、，给养羊业的发展造成了极大的损失，特别是对西部地区蓬勃兴起的山羊养殖业带来了严峻的威胁。本病在贵州省属首次暴发流行，2002年10月以来，我省修文、镇远、铜仁、晴隆、遵义、德江、沿河和六盘水8个地区”21养羊较为集中的乡(镇)相继暴发流行一种全身皮肤出现痘疹的高度接触性、发热性传染病。主要表现为体温升高达40℃以上，食欲减退乃至废绝，精神萎顿，眼结膜潮红、流泪，鼻和眼流脓性分泌物。潜伏期为1～2周，大部分病羊在眼周围、唇、鼻、颊、腹部和尾内侧出现大小不等的红疹，严重时波及全身皮肤和部分内脏器官，1～4d后形成小的丘疹突出于皮肤和内脏器官表面，并逐渐扩大为灰白色硬结和丘疹一水疱型，后者几天

5、后转为水疱，水疱破溃后形成痂块，最后痂块脱落遗留白色的痕迹。本病从外地引入带毒羊后，陆续发病并很快蔓延至全群。成年羊发病率和死亡率较高，孕羊大多流产或产弱羔，羔羊比成年羊易感。根据临床症状和剖检病变可对山羊痘作出假定性诊断，确诊必须依赖于实验室检查。山羊痘病毒感染以后抗体反应水平较低，血清学诊断的应用受到一定限制““。通过“中文科技期刊数据库检索”查询自1989年以来全国的兽医类主要期刊，关于山羊痘的文献共133篇。国内学者主要依据临床症状和剖检病变对山羊痘进行诊断(83／i33，62．4％)；采用电镜观察病毒粒子的形态特征(5／133，3．76％)；接种鸡胚绒毛尿囊膜观察形成的痘斑(4

6、／133，3．01％)。国外学者采用可溶性抗原对诊断山羊痘的琼脂扩散试验(AGP)、乳胶凝集试验(LA)和反向问4接血凝试验(RPHA)j{￡彳于了评价”“；采用可溶性抗原制备高免山羊血清对Dot—ELISA和RPHA的检测效果进行了比较。⋯。近年来在山羊痘的研究工作中，国内很少报导病毒分离与鉴定的内容，对山羊痘研究多采用鸡胚接种、犊牛睾丸原代细胞培养物通过电镜观察。本研究从以下几个方面进行：①分别取患病山羊皮肤和瘤胃粘膜痘疹、鸡胚绒毛尿囊出现的痘斑、病毒感染细胞培养物为材料，按常规方法作超薄切片，电镜观察发现大量具有典型痘病毒形态征病毒粒子。②痘疹材料接种鸡胚绒毛尿囊膜，感染鸡胚可见胚

7、体充血、出血、绒毛尿囊膜增厚且在接种部位出现痘斑。在BHK一21、Veto—E。传代细胞上接种痘疹材料以后观察到感染细胞收缩、变圆、聚集成簇、形成拉网状的细胞病交效应，由中国兽药监察所提供的山羊痘参考血清能够抑制这种细胞病变效应。通过BHK：．、Vero—Ea传代细胞从晴隆送检的病料中分离出1株贵州山羊痘流行毒株命名H—Gz毒株。“：从内蒙古生物药品厂的活疫苗分离出1株山羊痘疫苗毒株．③将病毒感染细胞培养物人工接种健康山羊，复制出与