布病病原学及血清学咸阳

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1、布病病原学及实验室诊断陕西省疾病预防控制中心布氏菌概述布鲁氏菌病（Brucellosis）是由布鲁氏菌属（Brucella）的细菌侵入机体，引起的人畜共患传染－变态反应性传染病，简称布病,是《中华人民共和国传染病防治法》规定报告的乙类传染病。1887年英国军医Bruce首先从死于“马耳他热”的英国士兵的脾脏中分离出羊种布氏菌。1887年，英国军医Bruce从马耳他岛死于“马耳他热”的士兵脾脏中首次分离到羊种布氏菌；1897年丹麦学者和1914年美国学者又分别从流产母牛的羊水和猪流产胎儿中分别分离到牛种布氏菌和猪种布氏菌。最近半个世

2、纪以来，在布病诊断、免疫、预防和治疗等方面都有较深的发展，1953、1956和1966年又分别发现了绵羊附睾种布氏菌、沙林鼠种布氏菌和犬种布氏菌。布氏菌是怎么发现的？1994年，Foster在英国从海洋哺乳动物体内分离到布鲁氏菌，后来在地中海、南美、澳洲等世界许多地方的海洋哺乳动物体内分离到布鲁氏菌，表明其分布是世界性的。与其它布鲁氏菌种一样，也能引起动物流产，并可感染人。根据其表型和分子生物学特性分成2个种，鲸种布鲁氏菌(B.ceti)和鳍种布鲁氏菌(B.pinnipedialis)2008年，德国和捷克科学家报道了一个新布鲁氏

3、菌种-田鼠种布鲁氏菌(B.microti)。2010年德国人HolgerC.Scholz等从具有临床症状的乳房移植感染的71岁病人身上分离到一株布氏菌，鉴定结果为一个布鲁氏菌新种，为湖浪种(B.inopinata)。目前尚未得到布鲁氏菌分类小组委员会承认。1994年分离出的2个海洋种和2008年分离的田鼠种已列入分类，即目前为9个生物种，22个生物型。生物种生物型常见宿主羊种1~3绵羊和山羊牛种1~7,9牛猪种1~5猪、野兔、鹿、鼠类沙林鼠种1沙林鼠绵羊附睾种1绵羊犬种1犬鲸种1海洋哺乳动物鳍种1海洋哺乳动物田鼠种1豚鼠【9种】【

4、22型】2013年，我省分离出3株布鲁氏菌，2014年共分离出20株（绥德7、延川3、定边2、子长2、旬阳2、宝塔区延长宜川麟游各1株）；1991年以前流行优势种型为羊1、2型，1996年后则为羊1、3型。陕西省是以羊型菌为主，牛、犬种布鲁氏菌病的混合疫区，流行优势种随时间推移发生了变化。形态和培养特征布氏菌属细菌是一组微小的球杆状革兰氏阴性菌，可被所有的碱性染料所着色，吉姆萨染色成紫红色；无芽孢、无鞭毛、无质粒、不形成荚膜。营养条件高，生长缓慢，生长所需温度为20-40℃，最适温度为37℃.通常要经过4-6天，有的甚至要经过20

5、-30天（双相培养基）才能长出菌落。布氏菌对物理、化学因子的抵抗力不同环境中的抵抗能力从种上来说，羊种毒力最强，猪种和牛种次之，犬种的毒力很弱，几乎不引起人致病。由于菌种毒力等因素的不同，患病后的临床表现也不完全一样。羊种布鲁氏菌患者中毒症状严重，多有典型的发烧、多汗、乏力、关节肿痛、肝脾及睾丸肿大等急性症状。布氏菌的毒力布病发病过程布氏菌的实验室检验实验室要求：布氏菌是高致病性病原微生物，从危害程度来说为第二类病原微生物。布氏菌的分离培养要在生物安全二级以上实验室中进行。样品采集培养分离菌株鉴定种型鉴定细菌学检验32.12.1.

6、1布氏菌培养检查材料：人或动物的全血动物流产胎儿（胎儿的肝脏、肺、胃内容物）动物脏器、动物胎盘、关节液、阴道分泌物等新鲜乳汁2.1.2双相血培养瓶采集对象：对急性期和慢性活动期病人未用药前进行血液采集。采样方法：1.使培养瓶恢复至室温、编号；2.去掉培养瓶的保护帽，用酒精或碘消毒瓶塞；3.用注射器无菌静脉穿刺采集血液5mL，注入血培养瓶；4.再次消毒瓶塞和保护帽，盖好保护帽；5.从一侧到一侧倾斜培养瓶数次，混匀血液和肉汤。双相血培养瓶培养方法1.将瓶子水平放置用肉汤冲洗琼脂5-10分钟以接种琼脂；2.37℃直立培养。每隔一天观察一

7、次结果，如未长菌，可通过冲洗再接种一次。30天未出菌，可定为阴性，其血培养瓶经高压灭菌处理；如长菌，4℃冰箱保存。3.培养后观察肉汤和琼脂：出现下列一种或更多现象者为阳性结果：琼脂上：出现菌落或产生气体。肉汤中：出现浑浊、沉淀或溶血。县镇村组来源及编号：绥德县1号姓名：张三采血时间：2015年7月1日布氏菌特异的油滴样菌落布氏琼脂布鲁氏菌菌落血平皿布氏菌菌落布氏菌革兰氏染色3.1.4布氏菌菌株鉴定布氏菌诊断血清凝集试验H2S产生试验，CO2培养依赖试验染料抑菌试验(硫堇，碱性复红)单项特异性血清A、M凝集试验粗糙型（R）血清凝集试

8、验噬菌体裂解试验PCR检测其他方法检测生化测定脂肪酸分析PFGE等羊种布氏菌噬菌体裂解PCR检测AMOS-PCR检测方法提取DNA——PCR扩增——电泳血清学检验2.23.2.1诊断标准（1）流行病学接触史：密切接触家畜、野生动物、畜产品、布氏菌培