银杏内生链霉菌HG2393的鉴定及其对小菜蛾的生物活性研究

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1、浙江大学硕士学位论文银杏内生链霉菌HG2393的鉴定及其对小菜蛾的生物活性研究姓名：徐红星申请学位级别：硕士专业：农业昆虫与害虫防治指导教师：张传溪;俞晓平20050501Y732988单位代码1035研究生学号20216091硕士学位论文银杏内生链霉菌HG2393菌株的鉴定及其对小菜蛾的生物活性研究答辩委员会主席(姓名、职称、单位)论丈评阅人(姓名、职称、单位)答辩委员(姓名、职称、单位)胡萃教授、博导浙江大学应用昆虫学研究所张志涛研究员、博导中国水稻研究所章强华研究员浙江省农业厅夏湛恩研究员塑壅望奎些壁量堕周雪平教授、博导浙江大学生物技术研

2、究所鲁兴萌教授、博导浙江大学动物科学学院沈志成教授、博导浙江大学应用昆虫学研究所俞晓平研究员、博导浙江省农业科学院论文答辩日期2005年6月11日本研究承蒙浙江省科技厅攻关项目(2004C32005)浙江省自然科学基金项目(Y304193)资助致谢本论文是在导师张传溪教授和俞晓平研究员的悉心指导下完成的。从论文选题、试验设计和论文写作等每个环节都倾注着导师的心血。他们渊博的学识、尖锐敏捷的思路、严谨治学的态度、踏实敬业的精神和诲人不倦的作风，使我终身受益。三年来，导师在我的学习、科研和生活中给予诸多的关怀、谆谆的教诲和悉心的指导，令我终身难忘。

3、谨此论文完成之际向两位业师表示衷心的感谢与崇高的敬意!昆虫所的胡萃教授、何俊华教授、程家安教授、刘树生教授、叶恭银教授、陈学新教授、沈志成教授、徐志宏教授、祝增荣教授、娄永根教授、施祖华教授和莫建初教授等给予了热忱的鼓励和指点。余虹副教授、蒋明星副教授、姚洪渭副教授、吴晓晶副教授和张志珏老师、芮开宁老师、马永芳老师等给予了热心的帮助和支持。本论文从设计到成文，始终得到了本实验室夏湛恩研究员、吕仲贤研究员、陈建明副研究员、郑许松助理研究员、陈列忠助理研究员、张珏锋小姐及博士后王开金和陈法军以及中国计量学院申屠旭萍讲师等热忱的指点和帮助，提出了不少

4、建设性的意见。这些无疑为我顺利完成学业以及今后开展科研工作奠定了坚实的基础。在研究生学习期间，还得到了浙江大学农业与生物技术学院和植物保护系各级领导和老师、浙江省农业科学院和植物保护与微生物研究所有关领导和同事的热情关怀和支持。在学习期间，还得到了众多学长、同学和朋友们的大力支持和帮助，他们是博士生尚金燕、徐海君、杨章女、杨丽荣、邢丽萍、王敦、马秀萃、林建国、李江红、郭忠建、顾奇伟、安世恒以及硕士生陈亮、王慧等。感谢中科院微生物研究所黄英和李伟两位老师在菌株鉴定方面给予的帮助。在此，谨向所有关一tL,和帮助过我的领导、老师、同学和朋友致以最诚挚

5、的感谢!最后，我要感谢我的妻子陈晓芸、我的父母和岳父母及家人，正是他们的理解、支持、鼓励和奉献，才使我能集中精力学习和研究，顺利完成学业。再次深深地感谢大家!作者2005年5月于杭州中文摘要从浙江杭州、长兴和临安等地银杏产区采集的银杏GinkgobilobaL．根、茎和叶中所分离到32株内生放线菌，在所有样品的发酵液(即胞外产物)对小菜蛾PlutellaxylostellaL．幼虫均无杀虫活性，但编号为HG2393菌株的乙醇提取液(即胞内产物)对小菜蛾具有较高的生物活性。本论文对银杏内生链霉菌HG2393菌株进行鉴定，并对发酵条件及其对小菜蛾的

6、生物活性作了初步研究。结果如下：根据形态特征、细胞壁组分测定和16SrDNA序列分析结果表明，菌株HG2393属于链霉菌属。其培养特征、生理生化特性和16SrDNA序列均与灰色链霉菌(Streptomycesgriseus)极为相似。但是，HG2393与《放线菌的分类和鉴定》中几种较典型灰色链霉菌在碳源利用等生理生化特征存在显著差异，故认定菌株HG2393为灰色链霉菌(Streptomycesgr括eus)的新亚种，定名为灰色链霉菌杭州亚种(Streptomycesgriseussubsp．hangzhouensis)。在本文采用的8种不同C／

7、N的培养基，有机质含量较高的6号培养基有利于HG2393菌株产杀虫活性成份。这与大部分抗生素类物质生产菌的发酵情况类似。研究表明，豆饼粉、玉米粉和蛋白胨是影响其发酵的关键因素而较适合的发酵条件为：28。C、初始pH值为6．5、装液量为300ml三角瓶中装80ml培养基。根据菌丝的生长情况及pH值的变化，该菌株在发酵时大体上可分为三个明显的阶段：0-36h为菌丝生长期，48．60h为产物合成期，72h以后为菌丝自溶期。而从对小菜蛾的杀虫效果来看，该菌株的有效组份产量随发酵时间逐渐增大，60h达最高峰，之后由于菌丝自溶及孢子重新萌发等原因，有效组份

8、含量略有变化，因此该菌株的发酵应该在60h左右结束最为合适。HG2393菌丝体丙酮提取物对小菜蛾幼虫的生物活性略高于乙醇提取物，其校正死亡率分别为45