高、低转移人卵巢癌细胞系蛋白质组表达差异的研究

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1、博十学位论文高、低转移人卵巢癌细胞系蛋白质组表达差异的研究摘要背景：卵巢癌是女性最常见的恶性肿瘤之一。近年来随着分子生物学技术的进展与更新，卵巢癌发生的分子机理研究也逐层深入，发现了⋯些卵巢癌易感基因和相关基因；然而由于生命活动真正的执行者是蛋白质，基因水平无法涵盖并解释一切表型，因此卵巢癌的分子生物学研究领域进入蛋白质组学阶段。鉴于国际上蛋白质组学研究自提出至今亦不过十年，卵巢癌相关蛋白质数据库尚不完善，因此卵巢癌蛋白质组学研究于国内外尚少有报道。由于细胞培养过程的相对标准化，结果具有良好的可对比性，而且实验

2、条件易于操控，因此建立于细胞系模型基础上的技术方法研究，是进行卵巢癌相关蛋白质组学研究的基础。基于此目的，本研究以卵巢癌高、低转移细胞株为研究对象，采用比较蛋白质组技术，鉴定与转移相关的候选蛋白，有助予了解卵巢癌转移的机制，可望筛选出早期诊断的标志物和新药靶点，并为探索应用蛋白质组学技术作为临床病理诊断的补充手段的可能性提供理论依据。第一章卵巢癌细胞株蛋白质双向电泳和图像分析目的：1．建立卵巢癌细胞株表达蛋自质组研究中双向凝胶电泳(Two．dimensionalgelelec仃0phoresis，2-DE)技术

3、分离蛋白质的实验方法与优化条件。2．寻找2一DE图谱上的差异表达蛋白点。方法：博十学位论文高、低转移人卵巢癌细胞系蛋白质组表达差异的研究1．对进行体外培养、收集的卵巢癌细胞，经裂解液破碎后提取总蛋白。将细胞蛋白样品分别进行双向凝胶电泳实验，第一向采取固相pH梯度等电聚焦电泳，第二向采用sDS一聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳，最后进行硝酸银和考马斯亮蓝染色；2．通过双向电泳图像分析软件对2一DE图谱进行数字化分析匹配与对比，并通过统计学分析方法评价双向凝胶电泳结果；3．在重复性实验过程中进行各个实验步骤的优化和改良。结果

4、：1．采用优化的双向凝胶电泳技术获得了重复性良好的图谱结果。2一DE图谱中分子量在20一65kDa以及PI在4．5—7．7区域之间的蛋白点分离效果较好。2．高、转移卵巢癌细胞H0—8910PM的2一DE图谱分辨率为975±45个蛋白点；低转移卵巢癌细胞}10—8910中可分辨903±33点。HO一8910PM与H0—8910细胞中蛋白点的匹配率为83．5％，存在58个差异表达蛋白点，其中25个为“全或无”表达的差异表达蛋白点。结论：采用优化后的双向凝胶电泳技术条件能够成功地进行卵巢癌细胞株H0—8910刚与HO

5、一8910蛋白质的分离：蛋白质表达谱相似，二者之间存在蛋白质表达差异。第二章蛋白质鉴定一质谱分析与生物信息学研究目的：1．鉴定在2一DE图谱中存在的差异蛋白质。2．对鉴定出的各个蛋白质进行功能查询，进行与卵巢癌相关分析，推测它们在卵巢癌转移中的作用机理。方法：1．在2一DE图谱中分别选取“全或无”表达的25个蛋白点，16个博}学位论文高、低转移人卵巢癌细胞系蛋闩质组表达筹异的研究仅在}{0—8910PM表达，9个仅在H0—8910表达，经过胶内胰蛋白酶解，进行基质辅助的激光解析质谱分析；2．质谱获得的肽谱图和氨

6、基酸序列经过PMF数据库查询软件Mascot检索分析后，识别鉴定各个蛋白质；3．对鉴定出的各蛋白质进行功能查询与卵巢癌相关分析。结果：1．成功地获得了21个蛋白点的肽谱图和肽段氨基酸序列，经过数据库检索分析后，鉴定了15个蛋白质；2．在Ho一8910PM与Ho一89lO的15个差异表达蛋白质中：热休克蛋白27、细胞角蛋白20、可溶性尿激酶受体、粘着斑激酶等，可能参与卵巢癌的转移。结论：1。成功建立了卵巢癌细胞系蛋自质组学研究方法。2．卵巢癌细胞系HO一8910PM与HO一8910中存在特异的差异表达蛋白质，分别

7、涉及肿瘤增殖、肿瘤浸润、血管生成等肿瘤转移各个方面。实验证明应用蛋白质组学技术来判断卵巢癌高、低转移在理论上和方法上是可行的，从而为下一步寻找卵巢癌诊断和治疗标志物提供了参考依据。关键词：卵巢癌，转移，蛋白质组，双向凝胶电泳，质谱堕：!：堂堡监茎蔓：堡鉴垫△塑墨壁塑堕墨堂旦里塑墨堡篓墨!!!!翌Aproteomicstudyofdiff日encesamonghighandlOwmetastatichumanovari锄cancercelllineABSTRACTBakegmund：ov撕antumourison

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