慢病毒载体HIVP24快速检测卡

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1、QuickVerification™系列胶体金检测卡第1页共3页慢病毒载体（HIVP24）快速检测卡货号规格BF06202-1010条BF06202-100100条保存：常温，保质期1年一、原理本产品是基于胶体金侧向层析技术的HIV-1P24蛋白半定量检测卡，可以用于相关慢病毒载体和假病毒包装效率的快速评估（P24蛋白是慢病毒外壳中含量最大的标志性蛋白）。检测卡由层析膜、样品垫、金标垫、层析膜、吸水纸、背板等结构组成。在层析膜上固定有羊抗鼠多克隆抗体（质控线）和P24鼠单克隆抗体（检测线）；在金标垫上固定有胶

2、体金标记的另外一株P24鼠单克隆抗体。待测样品滴加到样品垫，通过毛细作用泳向金标垫，到达金标垫后，样品中的P24蛋白与金标垫鼠抗P24单克隆抗体结合形成复合物。复合物移动到检测线时，被检测线上的另一株P24鼠单克隆抗体所捕获。随着被捕获的复合物的堆积，在检测线上呈现出酒红色。当复合物泳动到质控线，羊抗鼠多抗捕获胶体金标记的鼠单克隆抗体，呈现酒红色。通过判读层析膜上检测线和质控线是否显色，判断样品中是否存在P24抗原。该检测卡的检测下限为1ng/mL，当样品中P24浓度在1ng/mL至500ng/mL时，检测线

3、颜色的深浅与P24浓度呈正相关，通过与比色卡（图1）比较，可以半定量待检标本中P24蛋白浓度，并大致估算慢病毒的滴度。T1T2T3T4T5条带编号T1T2T3T4T5P24浓度500ng/mL100ng/mL50ng/mL10ng/mL1ng/mLLPs/ml*6.25×1091.25×1096.25×1081.25×1081.25×107TU/ml6.25×106-71.25×106-76.25×105-61.25×105-61.25×104-5图1比色卡北京博奥龙免疫技术有限公司Tel:010-65420

4、277www.biodragon-immunotech.comQQ:473644017QuickVerification™系列胶体金检测卡第2页共3页*一个慢病毒颗粒（LentiviralParticle,LP）中约有2000个P24蛋白分子，用以下公式可以计算慢病毒载体的颗粒数（LP）：一个LP相当于：2000×24×103/(6×1023)gofP24=8×10-5pgofP24；或者说，1ngP24=1.25×107LPs（≈1.25×104-5TU**）**正常情况下，每100-1000LPs中会有1

5、个具有感染活性的病毒载体，即1TU（TransducingUnit）。注意：上述公式计算得到的LP值是理论值，检测样品中含有的游离的P24蛋白可能会使该值偏高。提示：通常上清中病毒含量需要超过106TU/ml，才能确保浓缩纯化后得到足够浓度的慢病毒载体（一般能浓缩150倍左右）。二、用途1.基于HIV-1的慢病毒载体包装效率检测无论使用何种慢病毒包装系统，包装效率都是决定试验成败的关键。传统的慢病毒包装效率检测的方法有ELISA法（检测P24蛋白含量）和Real-timePCR法（检测核酸拷贝数），这两种方法

6、都耗时费力，且成本高。与这两种方法相比，本产品使用简便，检测时间短，可以随时对转染效果进行评估。如在更换培养基时，吸取样品滴加到检测卡上，10-15min后即可判读结果。因此，使用本快速检测卡，可以快速评估转染效果，减少不必要的浪费。2.基于HIV-1的假病毒包装效率检测基于HIV-1的假病毒同样含有P24蛋白。在转染后，可以使用本检测卡对包装效果进行快速评估。三、组成1）检测卡；2）说明书四、使用方法1.打开包装取出检测卡，平放在生物安全柜台面上；2.用微量移液器吸取100μl细胞培养上清，滴加到样品窗（S

7、）中；3.静止10-15min后即可判读结果。北京博奥龙免疫技术有限公司Tel:010-65420277www.biodragon-immunotech.comQQ:473644017QuickVerification™系列胶体金检测卡第3页共3页五、结果判断1.在检测窗中，质控线（C）和检测线（T）均显色即为阳性；2.质控线（C）显色，检测线（T）不显色，检测结果为阴性；3.P24含量请根据比色卡进行判断；（如果T颜色过深，可以稀释样品重测）4.质控线（C）不显色，无论检测线（T）是否显色，检测无效。（图2

8、）阴性阳性无效图2检测卡显色样式六、问题及解决问题可能原因解决方案检测线及质控线颜色浅样品中有干扰物质用DMEM稀释后再次检测检测失败检测卡失效检查保质期、避免开袋后受潮背景较深培养基pH、盐浓度过高或其他干扰用PBS稀释数倍再次检测本检测卡仅限于科研使用北京博奥龙免疫技术有限公司Tel:010-65420277www.biodragon-immunotech.comQQ:473644017