AQP8在人羊膜上皮细胞WISH株中的表达及调控机制研究

《AQP8在人羊膜上皮细胞WISH株中的表达及调控机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、重庆医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果．据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我同工作的同志对本研究所傲的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意．申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任．i∞6．；‘学位论文版权使用授权书本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期问论文工作的知识产权单位属重庆医科大学．本入保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果

2、时署名单位为重庆医科大学．学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅．学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，可以采用影印，缩印或其他手段保存论文．论文作者签名：指导教师签名：日期：盔麴重庆医科大学硕士研究生学位论文缩写AQPcAⅣ呼WB英文全称aquaporm英汉缩略语名词对照RT-PCRReversetranscripton-polymerasechainreaction阳SEDl-APAGEFetalbovineserlllil8-Br-cAMP8-Bromoadenodine-3’5’一cyclicmonophosphate

3、中文全称水通道蛋白环磷酸腺苷蛋白印迹术逆转录一多聚酶链反应胎牛血清乙二胺四乙酸聚丙烯酰胺凝胶电泳8．溴腺苷一3’。5’环磷酸腺苷ECLEnhancechemiluminescence化学发光mRNAMessengerribonucleicaeidEBHRPPBSSDSTrisEthidiumbromideSodiumdodeeylsulfate信使核糖核酸溴乙锭辣根过氧(化)物酶磷酸盐缓冲液十二烷基磺酸钠三羟甲基氨基甲烷TEMEDTetramethylethylenediamine四甲基乙二胺Bpd)NABasepairComplenmentdeoxyribonucleicacid

4、碱基对互补脱氧核糖核酸重庆医科大学硕士研究生学位论文AQP8在人羊膜上皮细胞中的表达及调控机制研究摘要目的：羊水膜内转运是羊水吸收的重要调节方式，对羊水量的平衡起了重要作用，但其细胞和分子机制还不清楚。通过研究人羊膜上皮细胞AQP8的表达和调控，探讨羊水跨膜转运机制，为临床羊水量异常寻找治疗策略提供理论依据。方法：(1)培养人羊膜上皮细胞WISH株。随机分为实验组和对照组，对照组予以正常培养液常规培养。实验组分为3组：低渗组、高渗透组、环磷酸腺苷(cycliadenosinemonophosphate，cAMP)组。低渗透组将细胞培养液稀释至80％，60％两组，继续培养羊膜上皮细胞

5、；高渗组将细胞培养液浓缩至120％，140％两组，继续培养羊膜上皮细胞；cAMP组将8-Br--cAMP加入培养液，使其在细胞培养液中浓度分别为10VM、209M、40vM、1001aM、200心,t、400ⅢM，分别培养羊膜上皮细胞。各组分别在培养2h、4h、8h、16h、24h和48h时取样。各组重复培养6瓶。(2)采用Westernblot技术定量检测WISH细胞AQP8蛋白表达。(3)采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术半定量检测WISH细胞AQP8mRNA的表达。(4)采用免疫荧光组织化学方法原位检测WISH细胞上AOF8的分布。1国家自然科学基金项目。304006

6、162重庆医科大学硕士研究生学位论文结果：(1)实验组和对照组WISH细胞均能表达较低水平的AQP-8mRNA和蛋白，WISH细胞AQP8蛋白以糖基化形式存在。WISH细胞AQP8蛋白主要定位在细胞内，而在细胞膜的表达却相对较少。(2)各低渗组细胞AQP8mRNA和蛋白的表达水平均明显高于对照组(P

7、；高渗液培养的细胞其细胞膜上的荧光明显减弱而细胞内的荧光明显增强(3)8-Br-eAMP孵育的细胞随着其浓度的升高AQP8蛋白水平明显升高(P<0．05)。培养液中8-Br-eAMP为201xM～200“M时，其蛋白水平增加2～5倍，在2000M时达到峰值。AQP8蛋白水平在8h就开始增加，在24h达到峰值，增加约5倍。8-Br-eAMP孵育的细胞随着其浓度的升高AQP8mRNA水平明显升高(P<0．05)。培养液中8-Br-eAMP为20州～200pM时，其mRNA