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《以GPT和GFP为双重筛选标记的禽痘病毒转移载体的构建及鉴定-王艳丽》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第31卷第7期中国预防兽医学报Vol.31，No.72009年7月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJul.2009以GPT和GFP为双重筛选标记的禽痘病毒转移载体的构建及鉴定1，21，21*2121*王艳丽，李俊辉，姜永萍，夏俊，裴磊，冉多良，陈化兰(1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江哈尔滨150001；2.新疆农业大学动物医学院，新疆乌鲁木齐830052)摘要：为研制和开发以禽痘病
2、毒为载体的重组病毒疫苗，本研究构建了禽痘病毒通用转移载体pSY681-gfp-gpt，该载体含有gfp和gpt2种报告基因及背对的痘苗病毒晚期启动子P11和早期启动子P7.5，P11启动gfp和gpt两个基因，P7.5用于启动外源基因，在早期启动子P7.5下游引入NotⅡ和AflⅡ两个酶切位点，用于外源基因的插入。为检测禽痘病毒转移载体pSY681-gfp-gpt的有效性，将H9亚型禽流感病毒A/Chicken/Shanghai/10/01(H9N2)的HA基因插入到该载体中构建转移载体pSY681-
3、gfp-gpt-HA9，将转移载体转染已感染禽痘病毒S-FPV-017的鸡胚成纤维细胞，利用gfp和gpt同时进行双重筛选、数轮蚀斑纯化后获得了重组病毒rFPV-gpt-gfp-HA9，通过PCR、westernblot鉴定，结果证明，获得了能稳定表达H9亚型禽流感病毒HA蛋白的重组禽痘病毒rFPV-gpt-gfp-HA9，为今后重组禽痘病毒活载体疫苗的研制奠定了基础。关键词：重组禽痘病毒；绿色荧光蛋白；黄嘌呤鸟嘌呤磷酸转移酶；HA基因中图分类号：Q782文献标识码：A文章编号：1008-0589(2
4、009)07-0501-04Constructionandidentificationofafowlpoxvirustransfervector1,21,21*2WANGYan-li,LIJun-hui,JIANGYong-ping,XIAJun,121*PEILei,RANDuo-liang,CHENHua-lan(1.AnimalInfluenzaLaboratoryoftheMinistryAgricultureandStateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechno
5、logy,HarbinVeterinaryResearchInstitute,ChineseAcademyofAgricultureScience,Harbin150001,China;2.CollegeofAnimalMedicine,XinjiangAgriculturalUniversity,Urumqi830052,China)Abstract:Fowlpoxvirushasbeenusedasasafevectortoconstructvector-basedvaccineforthecon
6、trolofavianvirusdiseases.Inthisstudy,fowlpoxvirustransfervectorpSY681-gfp-gptwasconstructedbyinsertingtworeportergenes(gfpandgpt)underthelatepromoterP11andtheexogenousgeneunderearlypromoterP7.5.ThevectorwastestedbyinsertionoftheHAgeneofH9subtypeavianinf
7、luenzavirusA/Chicken/Shanghai/10/01(H9N2)andtransfectedintoCEFcellsinfectedwithS-FPV-017.Recombinantviruseswereselectedbygfpandgptfollowedbyseveralcyclesplaquepurification.WesternblotandPCRindicatedthatrecombinantFPVcouldefficientlyexpressHAgeneofAIVinC
8、EF.Keywords:recombinantfowlpoxvirus;greenfluorescenceprotein;xanthine-guaninephosphoribosyltransferase;hemagg-lutinin(HA)gene禽痘病毒活载体疫苗能够长期诱导机体不断产毒还能够在哺乳动物体内和非禽源细胞中产生一过[1]生细胞免疫应答反应和体液免疫应答反应。禽痘病性感染，而且能使所携带的外源基因表达。因此，*Correspondinga
