土壤杆菌E26细菌素对防治根癌病的作用及产素基因定位的初步研究

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1、中国农业大学硕士学位论文土壤杆菌E26细菌素对防治根癌病的作用及产素基因定位的初步研究姓名：罗官平生申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：王慧敏2002.6.1摘要E26菌株是本研究室针对葡萄根癌病而筛选的，以前的室内和温室试验表明，该菌能够弥补K84菌株抑菌谱的局限，对根癌病的防治效果显著，是一株很有潜力的生防菌株。平板检测表明该菌株产生细菌素，抑制根癌菌的生长。为明确细菌素在防治病害中的作用及产素基因所在的初步位置，为生产中的应用提供理论。“7参考。本研究采用mini—Tn5插入诱变的方法，

2、得到28796个转移接合子，进一步平板检测这些接合子对致病根癌菌K308和CY4的抑制作用即其产生细菌素的能力，得到了2个对根癌病菌抑制能力发生变异的接合子(其中产素能力丧失的编号为E1；产素能力降低的为E2)。E1和E2产素能力的不同表明E26菌株的产素基因不是单基因控制的。温室测定这两个突变株对根癌病菌的防治作用，发现产素突变株(E1和E2)与致病菌混合接种后明显产生肿瘤，其大小稍小于根癌菌单独接种，而比野生型E26与根癌菌混合接种后肿瘤大，这表明细菌素的产生能力是E26防治根癌病的重要但不是唯一

3、的机理。分别提取E1、E2及E26的质粒DNA和基因组DNA，以转座子Tn5上抗Kan的基因为探针进行Southern—blotting分析，结果表明E26的产素基因在质粒上或者与质粒有关。关键词：土壤杆菌：细菌素；质粒；点杂交AbstractAgrobacteriumvitisE26wasawild-typebiocontrolbacterium，isolatedinthislaboratory,whichcanproduceabacteriocinwithabroaderhostrangethan

4、agrocin84．Itisapotentialbiocontrolbacterium．Theobjectivesofthisstudyweretofindthelocationofthegene(s)codingbacterioeinatstrainE26．Inthistest，transposonmini—Tn59fp—kmwasusedtoinserttowild-typestrainE26．28796mutantswereobtainedafterUansposonmutagensis．The

5、bacteriocinproductionofthemutantsagainstK308阳．vitris)andCY4阳．tumefaciens)wastestedonABplates．Twomutants(onewithoutbacteriocinandanotherproduceslessbacteriocinasE2)wereobtainedanddesignatedasE1andE2respectively．Theresultsofgreen·houseexperimentsshowedtha

6、tthebacteriocinproducedbystrainE26Wasoneofmainmechanismsandplayedanimportantroleinbiocomrolofcrowngalldieases．InordertofindthelocationofthegenecodingbacteriocininstrainE26，plasmidDNAandgenomicDNAwereextractedfromthestrainE26andthetwomutants．Apartoftrans

7、posonmini-Tn59t白一kmWasusedasprobebyDIG—Labelling．TheresultsofSouthern-blottingshowedthatthegenecodingbacteriocinlocatedattheplasmidorrelatedtotheplasmid．Keywords：Agrobacterium；bacteriocin；plasmid；dot·blotting主国壑些盍堂亟±逢塞圭堡拄苴基2§堕挂塑亘塞墅陵揎握蕉遁鳆佳出丛芒垂垂崮垦焦的塑生盟窭第一

8、部分前言植物根癌病(冠瘿病)是一种由土壤杆菌(dgrobacteriumspp．)引起的世界性细菌病害，在欧洲、北美、非洲和亚洲的一些国家与地区普遍发生，病原菌寄主范围广泛，可为害果树、花卉、林木等600多种植物，双子叶植物、裸子植物和少数单子叶植物都有可能受侵染(Decleeneeta1．，1976，1985；ConnerPfa』．，1992)，据近几年的资料，冠瘿病还在不断蔓延传播(Hseu，S．H．，1997；Found，A．M．，1998；Jos