古银杏雄株遗传多样性的ISSR分析及花粉用优良单株初步选育研究

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1、摘要本文以全国主要银杏分布区的古银杏雄株为研究对象，对银杏雄株遗传多样性进行了测定，并对不同地区的银杏雄花生物学特性、花粉的超微结构及多种营养成分进行了差异性分析。得出结论如下：l、本文对影响银杏ISSR．PCR扩增效果的一些因素如模板DNA浓度、Taq酶用量、引物用量、dNTP的用量以及退火温度等指标进行筛选和优化。筛选优化出可用于银杏ISSR．PCR分析较适宜的反应条件：Taq酶0．3U，2“L的10×Bufferf含15mMMgCl2)，模板DNA40ng，dNTP0．2mmol／L，引物0．5Itmol／L。PCR扩增程序：9

2、4℃变性5min，然后进行38个循环：94℃变性30s，48℃～53℃(根据引物面定)退火30s，72℃延伸lrain最后72℃延伸10rain，4℃终止反应。2、从60个ISSR引物中选出13个扩增条带较多、信号强、背景清晰的引物用于ISSR-PCR反应，13个引物对97个银杏雄株进行扩增共扩增出114条DNA条带，其中多态性DNA条带83条，占72．8％，每个引物扩增条带数平均8．76条。银杏雄株的平均有效等位基因数(Ne)为1．8117，平均基因多样度为(h)O．4374，平均Shannon信息指数(I)为O．6253。聚类结果

3、显示雄株间亲缘关系与地理位置相关。结果表明银杏雄株具有比较丰富的遗传多样性。3、本研究借助扫描电镜对33个银杏古树雄株的花粉外壁形态特征进行观察，发现银杏花粉外部形态基本一致，赤道面观为橄榄形或梭形，侧面观为长椭圆形，萌发沟与花粉近等长。但在光滑程度、纹饰特征、微孔情况等方面存在比较明显的差别。结果表明，银杏花粉形态具有多样性和复杂性。4、来自不同地区的33个银杏古树雄株单株问具花短枝上花穗数、花穗长、花穗宽、花药数、花药长、花药宽、花粉长、花粉宽、绝对出粉率等性状指标均达极显著差异水平。6、33个银杏雄株的花粉生活力平均值为73．4

4、2％。泰兴02、郯城02、南雄02、泰兴01和天目01几个单株的花粉生活力较高，在生产上可作为优良授粉树。5、本文通过因子分析和聚类分析，初步挑选出了奉化01、南雄Ol、南雄02、通江02、西峡02、泰兴01、广德01、南京01、天日0l、长兴04、北京01、泰安02等12个单株作为选育花粉产量高的品种的备选单株。7、银杏花粉之间黄酮、内酯、VBl、VB2、Vc和氨基酸含量差异极显著。本试验首次在植物花粉中检测出内酯成分。本文按照不同营养成分初步确定出营养成分含量较高的单株作为备选单株：略阳01、重庆01、金寨01、南雄01、嵩县Ol

5、、安化01、康县Ol、奉化01八个单株的花粉中黄酮、内酯含量与黄酮内酯总量与其他单株差异显著，且含量较高，可作为花粉开发中黄酮内酯方面的备选优良单株；桂林09、略阳Ol、邳州01、桂林06、南雄02等5个单株可以作为VBl含量较高的备选优良单株；桂林09、邳州01、奉化01、都江堰Ol、泰安Ol等5个单株可以作为银杏花粉中VB2含量较高的备选优良单株；泰兴Ol、重庆01、南京01、泰兴02、略阳01等5个单株可以作为银杏花粉中vc含量较高的备选优良单株；泰兴02、桂林09、长兴04、桂林06、西峡02、郯城01、重庆01、通江02等几

6、个单株可以作为银杏花粉中氨基酸含量较高的备选优良单株；这些单株均可作为优良无性系原株进行选育用于银杏花粉开发。关键词：银杏；古树；雄株；ISSR；遗传多样性；花粉AbstractTheancientmaleGinkgotreeswhichcamefrommaindistributionareasofGin堙口BolibaLwerechosenasthestudyobjectsinthispaper,theirgeneticdiversitywereinvestigated，thedifferentanalysiswereperform

7、edforbiologicalcharacteristicsofGinkgomaleflower,theultrastructureandmanykindsnutrientingredientsofGinkgopollen．Theresultswereasfollows：l，TheinfluencingfactorsincludingconcentrationoftemplateDNA，TaqDNApolymerase，primerconcentration，dNTPsandtheannealingtemperatureuponthe

8、amplificationeffectwithPCRtechniquewerestudiedforoptimizingtheISSRreactionconditionsofGinkgo．Theresultsshowedt