抗菌肽chensinin1及其改造肽与脂质体模拟细菌细胞膜相互作用的研究

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1、分类号：密级：学校代码：学号：遣享师筢犬擎硕士学位论文抗菌肽chensinin．1及其改造肽与脂质体模拟细菌细胞膜相互作用的研究作者姓名：学科、专业：研究方向：导师姓名：马丽杰有机化学多肽生物化学王澈副教授尚德静教授2013年05月学位论文独创性声明本人承诺：所呈交的学位论文是本人在导师指导下所取得的研究成果。论文中除特别加以标注和致谢的地方外，不包含他人和其他机构已经撰写或发表过的研究成果，其他同志的研究成果对本人的启示和所提供的帮助，均已在论文中做了明确的声明并表示谢意。学位论文作者签名．墨巫垄学位论文版权的使用授权书本学位论文作者完全了解辽宁师范大学有关保留、

2、使用学位论文的规定，及学校有权保留并向国家有关部门或机构送交复印件或磁盘，允许论文被查阅和借阅。本文授权辽宁师范大学，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库并进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，并且本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。保密的学位论文在解密后使用本授权书。o一1学位论文作者签名：鱼』丝：：!：。指导教师签名：签名日期：加I弓年歹月谚日辽宁师范大学硕士学位论文摘要抗菌肽是一种阳离子、两亲性的膜活性多肽，具有广谱抗菌活性，可以改变膜渗透性，且对宿主正常细胞的毒副作用较小的特点。本文中的chensinin．1是本实验室

3、从中国两栖类林蛙皮肤分泌物中提取分离纯化而来的一种天然抗菌肽，一种富含正电荷的组氨酸／精氨酸组成的18个氨基酸的抗菌肽，二级结构为无规则卷曲。本论文中的其它抗菌肽是以chcnsinin．I为模板的改造肽。抗菌肽膜作用机制的研究引起了人们的关注。为了研究抗菌肽chcnsinin一1与细菌细胞膜的相互作用，根据细胞膜磷脂成分的差异，以脂质体模拟细胞膜的模型，逐步成为抗菌肽结构与功能研究中的常用方法，脂质体是一种双分子层结构。本论文系统的以脂质体模拟细胞膜模型，探讨抗菌肽chensinini．1及其改造肽的相互作用，以抗菌肽诱导钙黄绿的释放实验方法为基础，说明抗菌肽对模拟

4、细胞膜的破坏作用，进而探究抗菌肽和膜上磷脂比例的关系；再以不同分子量的荧光素包载脂质体实验探究抗菌肽诱导孔洞形成的大小；应用NBD标记抗菌肽来推论抗菌肽插入膜的方式；最后，采用扫描电镜观察脂质体形态。本研究旨在细胞膜模型的建立，模仿细菌细胞膜的磷脂双分子层结构，以人工混合磷脂分别模拟革兰氏阳性和阴性细菌细胞膜，更直接的研究抗菌肽的膜作用机制。实验结果表明：抗菌肽chcnsinin．1和chcnsinin．Ib可诱导脂质体膜形成孔洞，内容物泄漏，但是chcnsinin．Ib的破膜作用优于chensinin．1，从而验证了改造肽的成功，即溶血性很低，而破膜作用增强：对与

5、脂质体中的磷脂成分和组成，富含负电荷的磷脂更易于与抗菌肽发生相互作用；抗菌肽和脂质体的相互作用，说明随着浓度和时间的增加，抗菌肽可以插入膜内，形成的孔洞小于4．6nm。加入抗菌肽chensinin．I和chcnsinin．Ib后脂质体表面发生变化。关键词：抗菌肽；脂质体；细胞膜；磷脂抗菌肽chcminin-I及其改造肽与脂质体模拟细菌细胞膜相互作用的研究Antimicrobiolpeptideschensinin-1andanaloguesresearchontheinteractionofliopsomesmodelsbacterialcellmembraneAb

6、stractAntimicrobialpeptides(AMPs)withcationic，amphiphilicpropertieshaveabroadspectrumofmicrobicidalactivitywhichhasbeenprovedtobeassociatedwithmembranepermeabilization．AMPshavelittlecytolyticorcytotoxicactivityagainsthostcells．Herewedescribetheantibacterialpropertiesandmembraneinteract

7、ionofchensinin．1，al8-residue，arginine／histidine．richcationicantimicrobialpeptide，fromtheskinsecretionsofRanachensinensis．Chensinin-lmayadoptalargelyextendedconformation．Wesystematicallydesignandsynthesizeaseriesofchensinin-1analogues．Recently，studieshavedemonstratedthatdistructionofb