小麦种子贮藏蛋白鉴定及醇溶蛋白编码基因的分子克隆

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1、首都师范大学硕士学位论文小麦种子贮藏蛋白鉴定及醇溶蛋白编码基因的分子克隆姓名：郝春燕申请学位级别：硕士专业：遗传学指导教师：李雅轩;晏月明20060501首都师范大学硕士学位论文晰．分子量多集中在3000．5000103之间。咖醇溶蛋白分子量较大，且含量较少，零散分布在4500．8000kD之间。·醇溶蛋白编码基因分子克隆利用∞．醇溶蛋白基因引物F和Rl，采用AS．PCR基因克隆方法从普通小麦品种绵麦26与济麦19中扩增得到特异条带，进行DNA测序和序列分析后发现获得的DNA序列含有典型(o．醇溶蛋白

2、基因特征，证实它们都为睁醇溶蛋白编码基因。通过基因序列比对发现，不同基因之间的差异主要是由单个碱基的替换、缺失和插入造成的。伽醇溶蛋白重复区中典型的重复单元(repeatunit)是PFPQI-2(PQQ)1-2。分离得到的2个∞醇溶蛋白编码基因都含有2个终止密码子，因此都是沉默基因。从Genebank中钓取HMW-GS、LbtW-GS、醇溶蛋白及大麦醇溶蛋自的编码基因，利用生物软件DNAMAN对钓取的26个基因的DNA序列进行聚类分析，可以进一步了解它们之间的分子进化关系。编码∞．醇溶蛋白的基因聚类

3、在一个亚组，相似系数为76％．表明它们具有较高的同源性。从绵麦26与济麦177中克蹬的2个心醇溶蛋白基因由于都来源于面包小麦品种，同源性很高，相似系数高达99％，它们与大麦醇溶蛋白C型亚基之间具有较高的同源性(74％)，而与其它贮藏蛋白基因存在较大差异。相似系数低于50％。大麦醇溶蛋白D型亚基与小麦HMW谷蛋白亚基相似系数为48％，同分在一个亚组，说明它们存在一定的同源性，面m，7．醇溶蛋白基因与大麦醇溶蛋白B型亚基和LMW谷蛋白亚基基因具有较高的同源性。关键词：麦醇溶蛋白，麦谷蛋白，反相高效液相色谱

4、，生物质谱，AS-PCR，基因克隆。系统进化。Il首都师范大学硕士学位论文AbstractAsmajorcomponentsofwheatstorageproteins，thecompositionandcontentofwheatgluteninsandgliadinsplayanimportantroleinwheatquality．Separationandcharacterizationofseedstorageproteinsanddirectedcloneof也eirencodinggen

5、esarehighlyimportantforthestudyofglutenstructureandtherelatedrelationshipwithquality,whichCanalsoprovidealternativeresourcesforimprovementofwheatqualitythroughgeneengineering．Thestudyofwheatstorageproteinsgrowswitllthedevelopmentofseparationtechnology,A

6、stheinventionofadvancedseparationtechniques，itispossibletostudythestructuresofwheatseedproteinsonmolecularlevel．Formsl锄lce，reversed-phasedhighperformanceliquidchromatography(RP-HPLC)andmassspec打ophy(MS)providesI．ISfastandaccuratetoolstoanalyzewheatprote

7、insamplesOnalargescale．●SeparationandidentificationofwheatstorageproteinsbyRP-HPLCInthisstudy,thefactorsinfluencingRP-HPLCseparation，suchaScolumntemperature，elufiongrads，samplevolume，extracttimeofsampleandiI畸ectvolumeofsample，we陀optimizedtoestablishRP-H

8、PLCanalysissystemforscpara妇gwheatgliadinsandglutenins．netechnicalsystemestablishedincludedthatAgilentI100instrumentandreversed-phasedcolomn(ZORBAX300SB—C18StableBandAnaly6cal4．6x250mm，5-Micron)wereused．Themajoranalyaealparameters