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《高效凝胶色谱法测定聚烯亚胺的分子量及其分布》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、聚乙烯亚胺的分子量及其分布的水性凝胶色谱测定摘要：采用水性凝胶色谱方法分析了聚乙烯亚胺的分子量和分子量分布，确定在？？？条件下对样品的分离效果最佳，且结果的重复性和再现性在误差允许的范围之内？？关键词：聚乙烯亚胺，水性凝胶色谱，重复性，再现性前言聚乙烯亚胺也是一种广泛使用的高分子材料，可用作造纸助剂、粘合材料及其助剂、涂料及墨水助剂、纺织助剂和分散剂等。此外，聚乙烯亚胺(PEI)是1995年发现的重要的非病毒核酸载体周天洋等，中国药学杂志，43（10），766-770（2008）。由于基因治疗的发展，使得医治遗传疾病或癌症成为可能。成功的基因治疗依赖于有
2、效的基因载体。目前基因载体主要分为病毒载体和非病毒载体两大类，其中多种病毒载体已进入临床试验阶段，但其潜在的免疫原性和毒性仍令人担忧。因此近年来用物理或化学方法制备的非病毒基因载体，由于具有价格低、操作简单、安全性高等特点而备受关注。其中阳离子聚合物聚乙烯亚胺(PEI)因具有转染效率高等优点，是目前应用最广泛的非病毒载体之一。很明显，聚乙烯亚胺(PEI)的组成如分子量大小和分布会对其应用性能产生重要影响。例如，基因转染效率及转导过程中产生的细胞毒性与PEI的分子量及其分布关系密切。PEI的分子量分布范围很广，从低分子量的数百Da到几十万Da，其分子量测定
3、有许多困难。常用的黏度法，操作步骤繁琐、误差高且只能测得粘均分子量Mv，而得不到分子量分布的信息。采用TOF-MALDI方法可以得到低分子量PEI的分子量分布信息，但是该方法对高分子量PEI响应很低，很难得到有价值的信息。凝胶色谱法是简便快捷的测定多种分子量和分子量分布的有效方法，但是PEI不溶于用于该色谱的通用溶剂四氢呋喃，只能选用重复性相对低的水性GPC方法，即GFC。由于PEI类高分子易和许多商品色谱柱产生吸附，它的凝胶色谱分析并不容易实现。Kumoi等人Kumoi,Sadakatsu;Tsutsumi,Yukihiro,ToyoSodaKenky
4、uHokoku(1980),24(1),43-9利用0.1-0.4M乙醇胺和乙酸水溶液在pH5.1的条件下在TSK-GelG-2000PW+G-3000PW色谱柱上分析了分子量为140-20,000之间的PEI的分子量和分子量分布，其中分子量的分析采用激光光散射检测器。他们发现，丙氧基化的PEI与疏水性的凝胶固定相没有吸附相互作用，所以更易于分析。Guise等人在硅胶柱上研究了阳离子聚合物聚酰胺、表氯醇树脂、聚乙烯亚胺和聚乙烯吡啶的分析Guise,G.Bruce;Smith,GeoffreyC.;JournalofChromatography(1982)
5、,235(2),365-76.，发现不但pH值、离子强度和色谱柱对分离结果影响显著，盐的种类和高分子的浓度影响也很大。最近，张志群采用商品PEI为标样、利用水性GPC在Ultrahydrogel色谱柱上分析了PEI-25K供试品和自制的聚乙烯亚胺张志群，现代医学进展，8（2），356-357（2008），所得结果虽比文献结果更接近理论值且实现了对自制化合物的分析，但是测试结果和理论值或者厂家提供结果偏差仍较大。综上所述，上述各种方法虽然一定程度上实现了PEI高分子的分析，但是没有对结果准确性尤其是重复性等方面的评价，且一些方法使用较特殊的手段导致难以在一
6、般的分析实验室普及应用。本文采用TSK-gelG300PWxl和G6000PWxl色谱柱、利用通用的聚乙二醇标样实现了对PEI的分析分离，考察了影响所得结果的关键因素且发现了影响重复性的主要因素，所得结果有较好的参考价值。实验部分1.药品及试剂聚乙烯亚胺（PEI）为日本触媒产高分子化合物，分子量分别为1200、1800、10000和70000。聚乙二醇标样为？？？公司产品，分子量从？？？到？？？。流动相的相关信息？2.仪器设备水性凝胶色谱仪为Waters515pump；色谱柱为TSK-gelG3000PWxl和TSK-gelG6000PWxl结果与讨论1
7、.色谱柱种类的影响2.流动相种类的影响根据文献报道的GPC对样品的检测结果，可以用THF作流动相用GPC进行检测。我们分别将原料PEI和PEG-PEI的共聚物产品用THF溶解配制成0.5%的溶液，GPC检测结果如图1和图2：图1（PEI10000,Mw=10000）图2（PEG-PEI共聚物）以上两图中不论是原料PEI10000还是与PEG的共聚物,在GPC的色谱图中响应值都非常低,这样就无法标定它们的分子量.在这种情况下,我们经过讨论认为:PEI及它和PEG的共聚物都是水溶性的,可以考虑用GFC进行检测.我首先选用纯水作流动相,样品用纯水溶解配制0.5
8、%的溶液，GFC检测结果如下:（RI检测）PEI1800PEI10000BLAN
