实验五凝集反应-医学免疫学实验指导

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1、医学免疫学实验指导实验五凝集反应由长沙达尔锋生物科技有限公司整理【文章介绍】实验是映证理论，对学生进行基本技能训练和培养科学研究能力的手段。BioRike博瑞克根据《医学免疫学实验指导》一书系统整理了14个实验项目，每个实验说明实验目的，实验原理，实验内容方法，实验要求及注意事项，希望广大师生能够从中有所收获。BioRike简介：BioRike（中文简称“博瑞克”）是长沙达尔锋生物科技有限公司旗下的产品品牌,由旗下专业的生命科学实验室BioRike博瑞克研发和生产。BioRike是一家致力于生命科学和生物技术领域的高科技实验室，专门从事以Elisa试剂盒、抗体、细胞因子、免疫检测试剂

2、盒、血清等免疫学产品为主的生物试剂的研发与销售。【实验目的】1.了解凝集反应的原理、基本类型及其用途。2.熟悉玻片凝集试验、试管凝集试验、间接凝集试验的实验方法和结果分析。【实验用品】1.材料试剂：伤寒杆菌、大肠杆菌18～24小时琼脂斜面培养物、伤寒杆菌H血清、伤寒杆菌H菌液、待测孕妇尿液、HCG阳性孕妇尿液、1:10稀释伤寒杆菌诊断血清、ABO血型标准血清、类风湿免疫诊断试验（用变性IgG致敏的乳胶颗粒）、HCG致敏乳胶试剂、兔抗HCG诊断血清、待测血清、生理盐水。2.器材：洁净载玻片、巴氏吸管、乳胶皮头、接种环、酒精灯、特种铅笔（或记号笔）、小试管、牙签、采血针、75%酒精棉球、

3、无菌干棉球、试管架；1ml、5ml刻度吸管、37℃恒温箱（或37℃/56℃水浴箱）、显微镜。【内容和方法】一、玻片凝集试验(slideagglutination)1.原理玻片凝集试验(slideagglutination)是将已知的抗体直接与未知的颗粒性抗原物质(如细菌、立克次体、钩端螺旋体等)混合，在有适当电解质存在的条件下，如两者对应便发生特异性结合而形成肉眼可见的凝集物，即为阳性；如两者不对应便无凝集物出现，即为阴性。此法属定性试验，主要用于检测抗原，如ABO血型鉴定、细菌鉴定和分型等。2.方法（1）取载玻片一张（平置实验台上），用特种铅笔或记号笔划分为3格，并标明1、2、3。

4、（2）取巴氏吸管一支，套上乳胶皮头后，吸取1:10稀释的伤寒杆菌诊断血清1～2滴于第1、2格内，另取巴氏吸管一支，吸取生理盐水1～2滴于第3格内。（3）将接种环在酒精灯火焰上烧灼灭菌，冷却后取少许伤寒杆菌菌培养物与第1、3格内的诊断血清、生理盐水混合并涂抹成均匀悬液。然后用同样方法取少许大肠杆菌培养物与第2格内的的诊断血清混合并涂抹成均匀悬液。静置数分钟后观察结果。3.结果观察与判定如上述混合悬液由均匀混浊状变为澄清透明，并出现大小不等的乳白色凝集块者即为阳性（＋）；如混合物仍呈均匀混浊状则为阴性（－）。如肉眼观察不够清楚，可将玻片置于显微镜下用低倍镜观察。本次实验结果第1格内应出现

5、大小不等的乳白色凝集物（阳性），第2、3格内无凝集物，混合液仍呈均匀混浊状（阴性）。【注意事项】（1）伤寒杆菌为肠道致病菌，在实验中务必严格无菌操作，遵守实验规则，用后的载玻片应立即投入指定的容器中，接种环必须做灭菌处理。（2）取细菌培养物时，不宜过多，与抗血清混合涂抹时，必须将细菌涂散，涂均匀，但不宜涂得太宽，以免很快干涸而影响结果观察。二、人类ABO血型鉴定试验（玻片法）1.原理人类ABO血型抗原有A和B两种。A型红细胞膜上有A抗原，B型红细胞上有B抗原，AB型有A和B两种抗原，而O型则不含有A和B抗原。据此，如分别将抗A和抗B血清与待测红细胞混合，抗A和／或抗B血清与红细胞表面

6、上的相应抗原结合而引起红细胞凝集，根据其凝集状况便可判定受试者的血型（见表5-1）。表5-1血型鉴定试验结果与判定2.方法（1）用酒精棉球消毒无名指指端皮肤或耳垂，待酒精干后用无菌采血针刺破表皮，用毛细吸管取血1～2滴，放入含1m1生理盐水的小试管中，混匀，即成待检红细胞悬液(约2％)。取血后，应立即用无菌干棉球压迫针眼止血。（2）取凹玻片或载玻片一张，用记号笔分为两格，并注明A、B字样。（3）用巴氏吸管吸取抗A血清、抗B血清各一滴分别滴于A、B格内（也可用2ml的一次性注射器代替巴氏吸管）。（4）另用巴氏吸管取待测5%红细胞悬液，于A格和B格内各加一滴。然后分别用牙签将抗血清与红细

7、胞搅拌均匀(也可轻轻晃动载玻片以促其充分混匀)，以加速其反应。将玻片放置于实验台上静置数分钟后，在白色背景下观察凝集情况。3.结果观察与判定如混合液由均匀红色混浊状逐渐变为澄清，并出现大小不等的红色凝集块者即为红细胞凝集；若混合液仍呈均匀混浊状，则表明红细胞未发生凝集。如肉眼观察不够清楚，可将玻片置于显微镜下用低倍镜观察。不凝集（-）凝集（+）4.注意事项（1）试验用凹玻片或载玻片要清洁，注明A和B字佯。（2）所用抗A、抗B血清必须在有效期内(注意试剂包装