烟草疫霉菌分子变异研究

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1、分类号：密级：学校代码：10165学号：201011201遣掌师籍大学硕士学位论文烟草疫霉菌分子变异研究作者姓名：学科、专业：研究方向：导师姓名：周鹏微生物学真菌分类与资源利用吕国忠教授2013年6月学位论文独创性声明本人承诺：所呈交的学位论文是本人在导师指导下所取得的研究成果。论文中除特别加以标注和致谓}的地方外，不包含他人和其他机构已经撰写或发表过的研究成果，其他同志的研究成果对本人的启示和所提供的帮助，均已在论文中做了明确的声明并表示谢意。学位论文作者签名：图啦学位论文版权的使用授权书本学位论文作者完全了解辽宁师范大学有关保留、使用学位论文的规定，及学校有权保留并向国家有关部门

2、或机构送交复印件或磁盘，允许论文被查阅和借阅。本文授权辽宁师范大学，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库并进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，并且本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。保密的学位论文在解密后使用本授权书。学位论文作者签名：日馥指导教师签名：签名}：；：j期：方·侈年彳月7日辽宁师范大学硕士学位论文摘要烟草黑胫病(砌ytophthoranicofianae)是烟叶生产上最重要的病害之一，主要发生在我国南方，对烟叶生产构成严重威胁。该病菌可侵染多种茄科植物，以病残体形式在土壤中越冬存活。为深入了解烟草黑胫病菌的发生和变异规律，并为科

3、学防治该病害提供理论基础，本文采用选择性培养基从采自全国各地的烟草黑胫病样品中分离获得了大量菌株，并采用分子生物学方法，对其分子遗传变异规律进行了系统研究。本文主要开展了如下四方面的研究工作：1．本试验采用选择性培养基，以胡萝卜琼脂培养基为基础培养基，对寄自全国各地的疑似烟草黑胫病茎秆标本进行病菌分离。通过多次改良选择性培养基的药物配方试验，最后在胡萝卜琼脂培养基CA的基础上，研制出了适于烟草黑胫病菌分离的有效培养基，其药物配方为：利发霉素10rag(100％，上海生工生物工程有限公司)，氨苄西林5rag(100％，香港联邦制药厂有限公司)，五氯硝基苯5mg(20％，山西绿海农药科技

4、有限公司)，多菌灵5mg(60％，山东淄博恒生农药有限公司)，链霉素0．35mg(100％，上海生工生物工程有限公司)。采用该培养基可有效抑制其他霉菌和细菌的生长，从而利于成功分离烟草黑胫病菌。2．采用3种菌丝破壁方法与3种试剂提取方法相结合的9种方法，比较研究了烟草黑胫病菌菌丝基因组DNA的提取方法。结果表明，采用液氮研磨+CTAB／SDS提取法、液氮研磨十EZ．kit提取法和电钻研磨+EZ．kit提取法获得的基因组DNA经琼脂糖凝胶电泳和EF．1t1．PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳检测品质较好。在此基础上，利用ISSR引物UBC#808对三种待测DNA样品进行PCR扩增，证明上述3种

5、方法提取的基因组DNA适合于ISSR反应。3．采用28srRNA和B．tubulin基因序列分析方法，对来自全国各地的烟草疫霉代表菌株进行测序分析。结果表明，供试菌株的28srRNA序列差异较小，相似度较高，聚类结果可为两个群。供试菌株得到的[3-tubulin基因序列与NCBI的序列比对，相似度为99％，确定其分类地位。4．采用SRAP和RAPD两种分子标记方法对分离自我全国各地的140株烟草疫霉菌株的遗传多样性进行了分析，结果发现遗传图谱差异非常小，表明我国烟草疫霉菌遗传稳定。关键词：烟草疫霉菌；分离；DNA提取；遗传多样性烟草疫霉菌分子变异研究StudiesonMolecula

6、rVariationofTobaccoBlackShankPathogenAbstractTobaccoblackshank妒hytoph&oranicotianae)isoneofthemostimportantdiseasesintobaccoproduction．Asasoil—bornpathogen，P．nicotianaecallinfectavarietyofplants，andCallsurviveinsoilresiduesforlongertime．Inordertounderstandthepathogen’Sgeneticvariationandprovide

7、theoreticalfoundationforcontrolofthedisease，theauthorusedselectivemediatoisolatethepathogenfromtobaccomaterialssentfromvariouspartsinChina,andconductanalysisoftherimoleculargeneticviaration．Themajorresultsincludethefollowingfouras