沙丁胺醇酶联免疫分析及胶体金免疫层析方法的研究

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1、分类号：R155．5+1密级：(秘密、机密、绝密)学校代码：10057研究生学号：2008813023沙丁胺醇酶联免疫分析及胶体金免疫层析方法的研究StudyonEnzyme-LinkedImmunosorbentAssayandColloidalGoldImmunochromatographicRapidTestStripforSalbutamol专业名称：营养与食品卫生学(医)指导教师姓名：王硕教授研究生姓名：郭柏雪申请学位级别：医学硕。l：论文提交日期：2010年12月沦文课题来源：自选课题学位授予单位：天津科技大学天津科技大学学位论文原创

2、性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究工作所取得的成果。除文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包括任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果内容，也不包括为获得天津科技大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：日期：7州年弓月fy日知识产权和专利权保护声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师具体指导下并得到相关研究经费支持下完成的，其数据和研究成果归属于导师和作者本人，知识产权单位属天津科技大学；所涉及的

3、创造性发明的专利权及使用权完全归天津科技大学所有。本人保证毕业后，以本论文数据和资料发表论文或使用论文工作成果时署名第一单位仍然为天津科技大学。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：椰糯同期：矽1年；月IV-H学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，I司意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，同意公斫j沦文的全部或部分内容，允许论文被查阅和借阅。本人授权天津科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数掘库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保

4、密ll(请在方框内打“、J”)，在年解密后适用本授权二岛。本学位论文属于不保密l蝴请在方框内打“√”)。作者签名：吾衫批荡同期：卅f年弓月f弘Ff导师签名：j，硼日期：沙孵弓月l卵摘要本论文对食用猪肉中禁用药物沙丁胺醇的酶联免疫分析方法以及胶体金免疫层析检测方法进行了系统研究和分析。制备出沙丁胺醇丁二酸作为半抗原，混合酸酐法制备出免疫原SAL—KLH和SAL—HRP，碳二亚胺法制备包被原SAL—OVA，免疫后得到高效价和高灵敏度的沙丁胺醇多克隆抗体。通过优化各项实验条件，建立了简便、快捷、实用的沙丁胺醇直接竞争酶联免疫(ELISA)分析方法，此法

5、灵敏度IC50=0．80土0．10¨∥L；检出限ICl5=0．06士O．02gg／L。对所建立方法的性能指标进行了系统评价，考察了方法检出限、精密度、准确度，批问和批内变异系数均小于20％。以猪肉为例，确定了肉类食品的基质的处理方法，用稀释的方法消除基质可有效消除基质影响，实际样品的检出限为0．6099／kg。测定了7．099／kg、24．099／kg、50．0gg／kg三个添加浓度的检测，回收率在85％～100％之问。同时建立了沙丁胺醇胶体会免疫层析方法，进过优化得到方法的检出限为1．00I-tg／L，同样选取猪肉作为检测样品，经0．22gm微

6、孑L滤膜过滤后直接上样检测，在实际样品中的检出限为10．0099／L。分别向猪肉样品中添加三个浓度的沙丁胺醇，即71．tg／kg、5099／kg、10099／kg；同时采用两种方法进行检测沙丁胺醇标准品，经胶体金免疫层析法与直接竞争酶联免疫分析方法同时检测，结果一致性较好，验证了方法的准确性。关键词：沙丁胺醇；抗体；直接竞争ELISA检测；胶体金：免疫层析试纸条ABSTRACTInthispaper,thecompetitivedirectenzyme—linkedimmunosorbentassays(cd-ELISA)andthecolloi

7、dalgoldimmtmochromatographicrapidteststripforthedeterminationofSalbutamol(SAL)residuesinpigmuscleshadbeendeveloped．Weinvestigatedthemethodofcouplinghaptentocarrierprotein．SALwascoupledwithBovineSerumAlbumin(BSA)orHRPbymixedacidanhydridemethodandOvalbumin(OVA)bycarbodiimidemet

8、hod，producingtheimmuneantigen(SAL—BSA)，theenzymetrace(SAL—HRP)andthe