尿液中盐酸克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇的测定—胶体金免疫层析法编制说明

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1、广西地方标准《尿液中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇的测定》（征求意见稿）编制说明1．任务来源根据广西壮族自治区质量技术监督局桂质监函[2010]342号文件，关于下达2010年第二批广西地方标准制定（修订）项目计划的通知，由广西兽药监察所承担《尿液中盐酸克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇的测定—胶体金免疫层析法》（编号：2010-2032）地方标准制定工作，起草了征求意见稿，已完成大量的实验研究和验证工作。现将征求意见稿的说明汇报如下。2.本标准制定的目的和意义盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇快速筛选检测常用的

2、酶联免疫法（ELISA方法）由于对检测设备、环境条件、操作技能要求高，同时受检测周期长、小批量检测成本高等因素的限制，在基层推广应用较为困难。快速检测卡（以下简称检测卡），是以胶体金技术和免疫层析技术相结合生产的一种简便、快速、准确，可进行现场操作的快速检测方法。它利用抗盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇单克隆抗体、胶体金技术和免疫层析技术，不需要仪器和设备，在10min内就能检测出结果，可以为畜产品质量安全监管提供方便、快速、低成本的检测方法。3.制定本标准的依据本标准编写格式上依据以下标准：GB/T1.1—2

3、009《标准化工作导则第一部分：标准的结构和编写规则》GB/T2001.4-2001《标准编写规则第四部分：化学分析方法》4.本标准主要技术内容盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇都属于ß-2兴奋剂，易溶于水。本方法采用胶体金技术和免疫层析技术进行检测。我们通过大量实验对检测卡的检测限，重现性，影响因素进行了实验,盐酸克伦特罗检测限为3μg/L,莱克多巴胺检测限为3μg/L,沙丁胺醇检测限为5μg/L。4.1检测卡最低检测限试验将不同浓度的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇标准液分为5组，每组10个样，各组浓度分别

4、为2、3、4、5、6、7ng/ml，分别用检测卡检测，实验室温度为24℃，相对湿度60%，10min内观察结果（见表）。浓度检测项目盐酸克伦特罗莱克多巴胺沙丁胺醇备注2－（90%）－（90%）－（100%）“－”表示阴性，“＋”表示阳性（%）表示抑制率3+（100%）+（90%）－（100%）4+（100%）+（100%）－（80%）5+（100%）+（100%）+（100%）6+（100%）+（100%）+（100%）7+（100%）+（100%）+（100%）尿液中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺含量在低于3ng/m

5、l时（抑制率为10%），检测卡出现阴性结果；在3ng/ml以上出现阳性结果（抑制率＞90%）；沙丁胺醇在含量在低于5ng/ml时（抑制率为20%），检测卡出现阴性结果；在5ng/ml以上出现阳性结果（抑制率＞90%），由此判断，在本试验条件下，盐酸克伦特罗、莱克多巴胺检测卡的最低检测限为3ng/ml，沙丁胺醇检测卡的最低检测限为5ng/ml。4.2重现性试验取阳性尿样（6ng／ml）和阴性尿样各一份，分别在0、1、2、3、4、5、7、9h用检测卡重复检测,10min内观察结果，实验室温度24℃，相对湿度60%。时

6、间（小时）盐酸克伦特罗莱克多巴胺沙丁胺醇备注阳性阴性阳性阴性阳性阴性1＋－＋－＋－2＋－＋－＋－3＋－＋－＋－4＋－＋－＋－5＋－＋－＋－7＋－＋－＋－9＋－＋－＋－结果显示，阴性尿液与阳性尿液重复检测结果均一，表明该检测卡重现性较好。4.3不同尿液pH值条件进行检测卡检测取阴性尿样一份，随机分为6组，每组10个样，前3组每份样添加标准液，添加后浓度均为6ng/ml，作为阳性添加组；后3组不添加，作阴性组。阳性添加组与阴性组分别用盐酸与氢氧化钠试液调pH值为5.0、7.0和9.0，按检测卡操作步骤进行试验，观察结

7、果，阳性添加组尿样在不同pH值条件下用检测卡检测，各组均未出现假阴性结果。阴性组尿样在不同pH值条件下用检测卡检测，各组均未出现假阳性结果。4.4不同检测环境条件下进行检测卡检测根据温度、光照强度条件的不同要求，都按同样方法进行检测卡检测。1、2号为空白尿液作为对照，3、4、5、6、7、8号分别添加10ng/ml等量的标准样品尿液，10min内观察结果。样品温度℃光照强度lx备注25303540100200300500空白1--------空白1--------3+++-+++-4++++++--5++--+++

8、-6++++++++7++--++--8+++-+++-结果表明：在25℃和30℃下进行检测，结果良好（抑制率均为6/6）；在35℃和40℃下，显著影响检测结果。在200lx下进行检测，结果良好（抑制率为6/6）；在300lx和500lx下，显著影响检测结果。4.5样品测试4.5.1阳性尿液随机取阳性尿样20份（经ELISA试剂盒检测），用检测卡检测，实验室温度25℃，相