《G显带技术》PPT课件

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1、实验四人类G显带染色体制备技术一、实验目的1、掌握染色体常规片的制备技术2、掌握镜下各号染色体G带带型。3、了解人类染色体G显带技术方法二、实验原理（略）人们利用不同的方法和染料处理染色体标本后，可使每条染色体上出现明暗相间，或深浅不同的带纹，称为显带技术。上世纪70年代以来，显带技术得到很大发展，人染色体经胰蛋白酶或EDTA（乙二胺四乙酸二钠）等试剂处理后，再用Giemsa染料染色，染色体上出现深浅交替的横纹，即染色体的G带。在众多的显带技术中（Q带、G带、C带、R带、T带、N带），G带是应用得最广泛的一种技术。因为G显带技术

2、具有设备要求低、试剂便宜、G显带标本稳定而易于保存及观察方便等优点三、实验用品1、器械：恒温水浴锅、60ml立式染色缸、吸管、滴头、电吹风。2、试剂：0．02％胰酶溶液、0．4％酚红溶液、1NNaHCO3、10%Giemsa染液、生理盐水。3、标本：外周血培养按常规法制作染色体标本（白片）。四、实验内容（一）人类染色体常规片制备技术（二）G显带标本制备1、外周血培养按常规法制作染色体标本，自然老化3~7天左右。2、将0.02％胰蛋白酶溶液倒入染色缸中，加入0.4％酚红溶液2滴，并以1NNaHCO3调节PH7.0左右，使颜色为橙色

3、。混匀后，置于37℃水浴锅恒温。3、将经过老化的标本片投入0.02％胰蛋白酶溶液中消化30～60秒。4、取出已消化的标本片，立即投入磷酸缓冲液中，冲洗残留的胰酶。5、用10%Giemsa染液染色6-10分钟。6、自来水冲洗，凉干或电吹风吹干后镜检。低倍镜观察标本片寻找分散良好染色体转到油镜下观察先计数染色体总数识别染色体长、短臂及随体绘制染色体线条图标明1、2、3、16号，其余注明组别和判断核型性别。（二）、镜检正常人染色体标本形态观察结果分析：结果描述：分析：1、为什么没有染色体、染色体不分散？2、为什么染色体不显带、染色体发

4、毛？（二）、镜检先在低倍镜下选择分散良好、长度适中的中期分裂相，然后转至油镜下观察G带带型。选择带纹清晰的分裂相进行分析，并在实验报告纸上绘出快速线条分裂相，标明各条染色体序号。五、注意事项1、G显带的好坏，首先取决于染色体本身制片的质量，染色体长度要适中，以早中期为宜，且中期相丰富、分散好，无胞浆背景。若染色体边缘发毛，为显带过头，若染色体上未出现带纹，则为显带不足，根据具体情况调整显带时间。2、标本片龄不宜太长，片龄越长，细胞对胰酶处理的抵抗性越强，片龄过长的标本染色后会导致斑点状而非带纹。3、酶温度和处理时间需控制好，一般

5、胰酶处理时间不少于30秒。