实验十人类染色体g显带技术及g带核型分析

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1、实验十人类染色体G显带技术及G带核型分析实验目的1、初步掌握染色体G带标本的制备技术。2、了解人类染色体的G显带的带型特征。实验用品1、材料：常规方法制备的中期人类染色体标本（标本片龄不超过30天为宜）。2、器材：显微镜、恒温培养箱、烤箱、恒温水浴箱、冰箱、染色缸、小镊子、玻片架、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸。3、试剂：0.125%胰蛋白酶溶液、0.02%EDTA溶液、胰蛋白酶一EDTA混合液、0.85%生理盐水、蒸馏水、Giemsa原液、Giemsa稀释液、1/15mol/L磷酸缓冲液。实验原理人们将用各种不同的方法，以及用不同的染料处理染色体标本后，使每条染色

2、体上出现明暗相间，或深浅不同带纹的技术称为显带技术（bandingtechnique）。本世纪70年代以来，显带技术得到了很大发展，且在众多的显带技术中（Q带、G带、C带、R带、T带），G带是目前被广泛应用的一种带型。因为它主要是被Giemsa染料染色后而显带，故称之为G显带技术，其所显示的带纹分布在整个染色体上。研究发现，人染色体标本经胰蛋白酶、NaOH、柠檬酸盐或尿素等试剂处理后，再用Giemsa染色，可使每条染色体上示出深浅交替的横纹，这就是染色体的G带。每条染色体都有其较为恒定的带纹特征，所以G带后，可以较为准确的识别每条染色体，并可发现染色体上较细微的结构

3、畸变。关于G显带的机理目前有多种说法，例如，Lee等（1973）认为染色体上与DNA结合疏松的组蛋白易被胰蛋白酶分解掉，染色后这些区段成为浅带，而那些组蛋白和DNA结合牢同的区段可被染成深带。有人汄为，染色体ffi带现象是染色体木身存在着带的结构。比如用相差品微镜观察未染色的染色体时，就能直接观察到带的存在。用特殊方法处理后，再用染料染色，则带更加清楚，随显带方法不同，显出来的带特点也不一样，说明带的出现又与染料特异结合有关。一般汄为，易着色的阳性带为含有AT多的染色体节段，相反，含GC多的染色体段则不易着色。总的来说，G显带的机理还未搞清。内容与方法一、人类染色体

4、G显带标本制备1、胰蛋白酶法①将常规制备的人染色体玻片标本（未染色的白片）賈7O'C烤箱中处理2小时，然后转入37°C培养箱中备用，一般在第3〜7天进行显带。②取2.5%的胰蛋白酶原液2.5ml加生理盐水至50ml，配成0.125%的工作液并用NaHCO3调pH值至7左右。③将配好的胰蛋白酶工作液放入37°C水浴箱中预热。④将玻片标本浸入胰蛋白酶屮，不断摆动使胰蛋白酶的作用均匀，处理1〜2分钟（精确的时间自行摸索〉。⑤立即取出玻片，放入生理盐水屮漂洗两次。①染色。将标本浸入37°C预温的Giemsa染液（1:10的Giemsa原液和pH6.8的磷酸缓冲液）中染色10

5、分钟左右。②自来水冲洗（用细水小心冲洗）、晾干。③镜检显带效果。在低倍镜下选择分散良好的长度适屮的分裂相转换汕镜观察，若染色体未出现带纹，则为显带不足；若染色体边缘发毛为显带过头，此时应根椐具体情况增减胰蛋白酶处理时间重新处理一张标本。2、EDTA—胰蛋白酶法①取25ml生理盐水和25mlO.O2。％的EDTA溶液倒入立式染色缸中混匀。②取2.5%的胰蛋白酶原液1ml加入到上液中混匀，并用5%NaHCO3调pH值至7左右。置水浴箱预温至37°C。③将染色体标本片浸入胰蛋白酶一EDTA溶液中处理5〜20秒，同时轻轻摇动玻片。④取出标本立即浸入生理盐水中洗两次。⑤浸入3

6、7°C的Giemsa染液中染色5〜10分钟。⑥细水冲洗后晾干、镜检。二、正常人各染色体的G带特征A组：1〜3号染色体。1号染色体。短臂：近侧段有2条深带，第2深带稍宽，在处理较好的标本上，远侧段可显出3〜4条淡染的深带。此臂分为3个区，近侧的第1深带为lp21;第2深带为lp31。长臂：副缢痕紧贴着丝粒，染色浓。其远侧为一宽的浅带，近中段与远侧段各有两条深带，此中段第2深带染色较浓，中段两条深带稍靠近，此臂分为4个区，副缢痕远侧的浅带为lp21号带、中段第2深带为lp31号带，远侧段第1深带为lp41号带。2号染色体。短臂：nJ见4条深带，中段的2条深带稍靠近，此劈

7、分为2个区，中段两条深带之间的浅带为2p21。长臂：可见7条深带，第3和第4深带有时融合。此臂分为3个区，第2和第3深带之间的浅带为2p21带，第4和第5深带之间的浅带为2p31号带。3号染色体。在长臂与短臂的近中段各具有1条明S的宽的浅带。短臂：一般在近侧段可见1条较宽的深带，远侧段可见2条深带，其中远侧丨条较窄，且着色淡，这是区别3号染色体短臂的显著特征。在处理较好的标本上，近侧段的深带可分为2条深带，此臂分2个区，中段浅带为2区1带。长臂：一般在近侧段和远侧段各有1条较宽的深带，在处理好的标本上，近侧段的深带可分为2条深带，远侧段的深带可分为3条深带，此臂