《guan细胞融合》PPT课件

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1、第四章－1细胞融合CellFusion细胞融合概念融合方法融合过程融合的影响因素细胞融合细胞融合（cellfusion）：又称somatichybridizationorcellhybridization，指在自然条件下或人工方法使两个或两个以上的细胞通过无性方式融合形成一个杂合细胞的过程。它能重新组合两个亲本细胞的优良遗传信息，是研究细胞间遗传信息传递、基因在染色体定位、改良动物遗传特性及创造新的符合人类需要的新的细胞系极为有效的手段。自发融合：受精过程，成肌细胞融合，巨噬细胞融合，体外培养系统中的细胞融合诱发融合一、细胞融合的概念1962年O

2、kata发现仙台病毒可诱发艾氏腹水瘤细胞融合成多核细胞体，开创动物细胞融合的暂新领域。SingerandNicolson’sModelofmembranestructure:Thefluid-mosaicmodelisthe“centraldogma”ofmembranebiology.Thecorelipidbilayerexistsinafluidstate,capableofdynamicmovement.Membraneproteinsformamosaicofparticlespenetratingthelipidtovaryingde

3、grees.TheFluidMosaicModel,proposedin1972bySingerandNicolson,hadtwokeyfeatures,bothimpliedinitsname.ThechemicalcompositionofmembranesA.MembraneLipids:TheFluidPartoftheModelPhospholipids:Phosphoglyceride磷酸甘油酯andsphingolipidsGlycolipidsSterols(isonlyfoundinanimals)Membranelipids

4、areamphipathic.Therearethreemajorclassesoflipids:AnOverviewofmembranefunctions1.Definetheboundariesofthecellanditsorganelles.2.Serveaslociforspecificfunctions.3.provideforandregulatetransportprocesses.4.containthereceptorsneededtodetectexternalsignals.5.providemechanismsforce

5、ll-to-cellcontact,communicationandadhesion细胞融合机理细胞融合的关键：脂双层的接触靠近,细胞桥形成,胞质渗透－细胞核融合。胆固醇磷脂糖脂寡糖疏水a螺旋鳌合蛋白极性孔蛋白分子Hydrophobic疏水的Hydrophilic亲水的二、诱发细胞融合的方法病毒化学－PEG电融合1.病毒促进细胞融合病毒类融合剂是研究的最早的促融剂，一些致癌、致病病毒如疱疹病毒、天花病毒、副流感型病毒、副黏液病毒等，都能诱导细胞融合，但由于毒性大，应用上收到很大限制。仙台病毒（HVJ）是一类被膜病毒，诱导细胞融合的不是仙台病毒内部

6、的RNA，而是它的外膜。这一现象对你有何启示？HVJ促融机制：当病毒位于两个细胞间时，病毒表面spike上神经氨酸酶降解细胞膜上的糖蛋白，使细胞膜局部聚集在病毒周围，在高pH和Ca2+条件下局部细胞膜发生融合。2.化学融合剂促进细胞融合1975年Kao和Chayluk报道PEG(polyethyleneglycol,PEG)可促进细胞融合，Pontecorvo报道PEG促融效率高于仙台病毒100-300倍。PEG是一种多聚化合物，商品名卡波蜡Carbowax,分子量200－20000，靠醚键的联结使其分子末端带弱负电荷，目前已衍生达50多种。聚乙

7、二醇（PEG）介导的细胞融合原理：PEG带有大量的负电荷,和细胞膜表面的负电荷在Ca2＋的连接下，形成静电键，促使异源的细胞膜间的粘着和结合，在高pH,高Ca2＋溶液的作用下，将Ca2＋和与质膜结合的PEG分子洗脱，导致电荷平衡失调并重新分配，使两种细胞膜上的正负电荷连接起来，进而形成具有共同质膜的融合体。注意事项1PEG融合的关键是作用时间2PEG规格和纯度与融合效率有关3融合与细胞密度有关4融合液中加入少量CaCl2，即维持一定电导率，对细胞也有保护作用3.电融合技术（Electroporation）3注意事项1）对介质要求高，一般用高纯度的

8、蒸馏水并选用适当的非电介质溶液，如甘露醇等配制等渗性介质。2）注意控制高频交流电压和直流脉冲电压的强度和时间，以防止细胞连接成串或发生可