阪崎肠杆菌耐药性分析、超广谱β内酰胺酶检测及耐药机制研究

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1、分类号：R446．5Q754密级：(秘密、机密、绝密)学校代码：10057研究生学号：08841016阪崎肠杆菌耐药性分析、超广谱13一内酰胺酶检测及耐药机制研究Drugresistanceanalysis，esblesdetectionandmechanismsaboutdrugresistanceagainstcronobactersakazakiistrains专、lp名称：生物化学与分子生物学指导教师姓名：王硕教授研究生姓名：朱超申请学位级别：理学硕二L论文提交FI期：2011年】月论文课题

2、来源：国家项目学位授予单位：天津科技大学天津科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究工作所取得的成果。除文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包括任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果内容，也不包括为获得天津科技大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：霁筵同期：刀¨年孑月l毕同知识产权和专利权保护声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师

3、具体指导下并得到相关研究经费支持下完成的，其数据和研究成果归属于导师和作者本人，知识产权单位属天津科技大学；所涉及的创造性发明的专利权及使用权完全归天津科技大学所有。本人保证毕业后，以本论文数据和资料发表论文或使用论文工作成果时署名第一单位仍然为天津科技大学。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：察翘同期：刀『『年弓月l牛同学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位沦文的规定，l刊意学校保留并向国家行关部门或机构送交论文的复印件和Ibf版，I耵J意公柿论文的全部

4、或部分内容，允yF论文被查阅和借阅。本人授权天津科技大学可以将本学位沦文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密lI(请在方框内打“巾)，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密l翊(睛在方框内打“√”)。作者签名：粥超同期：朋『年罗月f弘FI导师签名：蚴、同期：工阴1年多月脾同摘要本研究参照美国临床和实验室标准化研究所(CLSI)相关标准，采用药敏纸片方法，分别对分离自食品中的19株阪崎肠杆菌进行包括头孢唑啉、头孢噻吩、头孢哌酮、头孢

5、曲松、头孢呋辛钠、头孢吡肟、庆大霉素、妥布霉素、氨曲南、氨苄西林、环丙沙星、氯霉素、四环素、苯唑西林、哌拉西林、美洛培南在内的共16种常规抗生素药敏检测。实验结果表明，19株阪崎肠杆菌对苯唑西林以及头孢噻吩的耐药率分别为100％并n78．95％，而对其余种类抗生素均呈现敏感反应。另外，本实验还采用CLSI中关于肠杆菌科超广谱B一内酰胺酶检测标准，采用纸片扩散法对19株阪崎肠杆菌进行了超广谱13一内酰胺酶检测，同时参照数据库中超广谱B一内酰胺酶基因序列，采用涵盖四大类13一内酰胺酶，总共10种超广谱p

6、一内酰胺酶扩增引物对菌株进行PCR检测，两种方法均未发现超广谱B一内酰胺酶阳性菌株，说明19株阪崎肠杆菌中不存在超广谱B．内酰胺酶。综合以上结果说明，目前食品中存在的阪崎肠杆菌仍为耐药性较弱的菌种，短时期内将不会对l临床治疗带来较大威胁。在阪崎肠杆菌耐药检测的基础卜，本论文还对阪崎肠卡，J：菌耐药SJLN进行了初步研究。实验选取对头孢噻吩耐药性最强的8号阪崎肠杆菌，利用Tn一5转座子进行随机突变，以获得头孢噻吩耐药相关基因，结果共得到转座成功的阪崎肠杆菌单克隆共108株。以突变前菌株作为参照，通过抑

7、菌浓度实验，检测在250rtg／mL的头孢噻吩存在的条件下，生长受到明显抑制的阪崎肠杆菌突变株。结果显示，共5株阪崎肠杆菌突变株在该浓度头孢噻吩存在的状况下，生长受到明显抑制，表明该5株突变株中转座子元件的插入位点为阪崎肠杆菌对头孢噻吩的抗性基因。关键词：阪崎肠杆菌；抗生素；超广谱S一内酰胺酶；转座子；抗性基因ABSTRACTInthisstudy．thestandardsofClinicalandLaboratoryStandardsInstitutewasin仃oducedtoevaluaten

8、ineteenstrainsofCronobacterSakaza肼fwhichwereisolatedfromfoodresourcesforantibioticsusceptibilitybydiskdiffusiontechnique．Andtheantibioticsweusedwerecefazolin，cephalothin，cefoperazone，ceflriaxone，cefuroxine，cefepime，gentamicin，tobramycin