芦荟Aloe超氧化物歧化酶的分离纯化与性质研究

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1、西南师范大学硕士学位论文芦荟（Aloe）超氧化物歧化酶的分离纯化与性质研究姓名：孙焕顷申请学位级别：硕士专业：植物学指导教师：唐云明2003.5.1卢菩越氧化物蛭化酶的分离纯化与性质研究芦荟超氧化物歧化酶(SOD)的分离纯化与性质研究摘要专业：植物学研究方向：植物生物化学指导教师姓名：唐云明研究生：孙焕顷超氧化物歧化酶广泛存在于各种生物体内。目前已从细菌、藻类、霉菌、高等植物、昆虫、鱼类、鸟类和哺乳动物等各种生物体内分离得到，并通过多种方法应用到实际中，如化妆品、医药、食品、人及动植物许多疾病的检测方面。但是大多是从动物体内提取，因动物体内SOD含量多，活性

2、高：而植物体内相对含量少，活性低。许多报道芦荟具有消炎、杀毒等多方面的功效，芦荟己作为药材、化妆品．保健食品在市场销售。可是至目前为止未见到从芦荟中分离纯化SOD的报道。基于以上三方面的原因，本文探讨了从芦荟中分离纯化SOD的方法并对其基本性质进行了研究。一方面为了更彻底地了解芦荟中的成分；另一方面为芦广荟中的SOD的应用、基因克隆奠定基础。／现将研究结果报告如下：(1．分离纯化将芦荟的叶子洗净、擦干，加入"Iris．HCI缓冲液进行组织捣碎提取SOD，高速离心；将提取液用丙酮使SOD沉淀、静止，低速离心：将沉淀用蒸馏水充分溶解，50℃水浴中加热15min，

3、离心除去部分杂蛋白，获得粗酶液。将粗酶液过DEAE一琼脂糖柱层析，得三个活力峰，分别收集、透析、干燥浓缩后；再上SephacrylS-200凝胶柱层析，按与DEAE．琼脂糖柱层析后同样的方法收集处理。将第二次得到的干燥的SOD进行同工酶电泳及活性染色、等电点聚焦电泳和SDS-聚丙烯酰胺：疑胶电泳。可知SOD．I，SOD．II。SOD—IU三种同工酶均得到完全分离纯化。SOD—I纯化倍数为60．1，活性回收率为3．4％：SOD—II纯化倍数为153，活性回收率为5．6％：SOD．IH纯化倍数为84．6．活性回收率为4．2％。由此可知利用此法SOD。II纯化倍数

4、及活·眭回收率在三个同工酶中最高。2．性质研究Cu,Zn．SOD对氰化物和过氧化氢均敏感。Mn．SOD对氰化物和过氧化氢均不芦蔷超氯化物歧化酶的丹高纯化与性赝俨究敏感。而Fe—SOD对氰化物不敏感，对过氧化氢敏感。lmmol／LKCN对芦荟中SOD活力几乎无影响；5mmol／LH202使芦荟中SOD活力完全失活。可以判定该酶是铁超氧化物歧化酶凝胶过滤法测得SOD．I的分子量约为46000D，SOD．1I的分子量约为35000D子量为，SOD．111分子量约为40000D。把通过凝胶过滤的SOD．I、SOD一11、SOD．Ill酶．进行SDS．聚丙烯酰胺凝胶电

5、泳(SDS．PAGE)测得芦荟中SOD的亚基分子量分别为：SOD．I约为23000D、SOD．II约为17000D、SOD-III约为19000D。这两种结果进一步证明芦荟中的三条SOD同工酶均为Fe—SOD；并且均由两个相同的亚基组成。等电点聚焦电泳进一步证实芦荟中的三条同工酶完全分离纯化，并测得它们的等电点分别为：8．9、7．6、7．35。修饰剂PMSF,／DTT，PC～tB，NBS，BrAc，IAc，SUAN，TNBS不适合检测SOD酶、t的功能基团。}，u／√关键词：芦荟(Aloe旧阳￡．VaTehinesis(Haw．)Berg．)；超氧化物歧化’

6、__‘_●一一酶(SOD)：分离纯化；性质研究7一∥<芦萎趣氧化物歧忆酶的分离纯化与性质酽宄PURIFICATIONANDNATURESSTUDYoFSUPEROXIDEDISMUTASEFROMALOEAbstractMajor：botanyDirection：-plantbiochemistryTutor：珏昭Yun—mingMasterstudent：SunHuan—qingEverykindofliringcreaturehasallsuperoxidedismutase．Now，superoxidedismutasehasbeenisolatedf

7、romgerms，algae，fungi，highplantinsect，fisb，birdsetc．andappliedtothedailYlife．suchasthecosmetiCSmediCine，food，morbibexaminationofpersons，animalSandplants．ButitiSmostlyabstractedfromanimals，becausethesuperoxidedismutasecontentinanimaliSmorethanthatinplantandtheactivityofthesuperoxided

8、ismutaseinanimalishigherth