一步法双重RT.PCR检测SARS冠状病毒技术研究

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1、维普资讯http://www.cqvip.com第18卷3期中国病毒学l8(3)：232—2362003年6月VIROLOGICASINIGAJune20o3一步法双重RT．PCR检测SARS冠状病毒技术研究周敦金，唐少文，王斌，杨华芬3刁平，许青3，刘斌3，杨继红，2料(1．武汉市疾病预防控制中心，湖北武汉，430022：2．中国科学院武汉病毒研究所，中国科学院分子病毒学重点实验量，，湖北武汉，430071；3．武汉市传染病医院，湖北武汉，430022)One-stepDuplexRT-PCRAssayforDetectionSARSAssociatedCoronavir

2、usZHOUDun-jin，TANGShao—wen，WANGBin，YANGHua-fen，DIAOPing，XUQing，LIUBin，GJi—hong'“，J．WuhanCentersforDiseasesPreventionandControl,Wuhan430022,China；2．TheKeyLaboratoryofMolecularVirology,WuhanInsitituteofVirology,TheChineseAcademyofSciences，Wuhan430071，China；3．WuhanInfectionDiseasesHospital,Wu

3、han430022,China)Abstract：AccordingtoPCRprimersforSARSdevelopedbyWHOnetworklaboratorieswesynthesize4primerpairs：BN1in—s／as、BNIout—s／as、SAR1一s／as、CORl／COR2andestablishassaysofone—stepRT—PCRfordetectionofSARSassociatedcoronavirus．SpecificDNAfragmentsaspredictedwereproducedfromspecimenW20bythe

4、assaysusingall4primerpairs．whileonespecificDNAfragmentWasproducedfromspecimenWlusingprimerpairBNIin—s／as．ThePCRproductsfromW20weresequencedandthesequenceshowedhighidentitytothatofallSARSassociatedcoronavirusinGenBank．whichshowedthatPCRproductsamplifiedfromW1andW20byourassaysWasspecificforS

5、ARSassociatedcoronavirus．Basedontheone—stepRT—PCRwedevelopedfourone—stepduplexRT—PCRforamplifyingtwofragmentinonereactionbycombinationof4primerpairsabove．Andtheassaysofone—stepduplexRT—PCRhavehigherspecificityandwerereliablefordetectionofSARSassociatedcoronavirus．Key、)Irds：SARS；Coronavirus

6、；One—stepRT-PCR；DuplexRT-PCR；Detection摘要：参照WHO公布的PCR检测SARS相关冠状病毒的引物序列，我们合成了4对引物，建立了一步法RT-PCR维普资讯http://www.cqvip.com周敦金，等．一步法双重RT．PCR检测SARS冠状病毒技术研究233管对引起SARS的病原有许多争论，但较倾向认为本在武汉市传染病医院采集，所有病例的诊断均严SARS可能的病原是一种冠状病毒科的一个新变格按照WHO的指导原则进行【3】。健康成人痰液、种。自2002年l1月中旬SARS出现以来，全球的喉嗽液、血液标本在开始建立一步法RT-PCR检测

7、科学家在病原的寻找、病原的分离鉴定、SARS冠SARS冠状病毒方法前从本实验室工作人员中采状病毒的基因序列分析进行了不懈的努力，2003年集，均无流行病学接触史。4月l6日WHO宣布SARS病原是一种以前没有见1．2PCR引物过的一种新冠状病毒。由于SARS病原确认时间较参照WHO在2003年4月l7日公布的用于短，目前还难以从市场上得到经过权威机关认可的RT-PCR检测SARS冠状病毒的引物序列【4J，我们SARS检测试剂。为此我们建立了一步法双重合成了BNIins／as、BNIout-s／as、SARIs／as