乳品中苯甲酸和山梨酸的测定

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1、北京东西分析仪器有限公司乳品中苯甲酸和山梨酸的测定一、方法提要山梨酸、苯甲酸是国际粮农组织和卫生组织推荐的高效安全的防腐保鲜剂，广泛应用于食品、饮料、烟草、农药、化妆品等行业。食品中添加的山梨酸、苯甲酸若超标严重，在一定程度上会抑制骨骼生长，危害肾、肝脏的健康。根据FDA的规定，苯甲酸在食品中的使用量为0.2~1.0g／kg。但婴幼儿乳制品中不允许添加。婴幼儿长期摄入苯甲酸也可能带来哮喘、荨麻疹、代谢性酸中毒等不良反应。但是现在一些婴幼儿奶粉中检测出了山梨酸和苯甲酸含量。本实验根据《食品安全国家标准—乳品中山梨酸和苯甲酸的测定》中提供的方法进行分析测定。去除试样中的脂肪和蛋白质，甲醇稀释，过

2、滤后，采用反相液相色谱法分离测定。二、试剂及标准溶液配制2.1试剂2.1.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。2.1.2亚铁氰化钾溶液（92g/L）：称取亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O]106g，用水溶解于1000mL容量瓶中，定容到刻度后混匀。2.1.3乙酸锌溶液（183g/L）：称取乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O]219g，加入32mL乙酸，用水溶解于1000mL容量瓶中，定容到刻度后混匀。2.1.4磷酸盐缓冲液（pH=6.7）：分别称取2.5g磷酸二氢钾（KH2PO4）和2.5g磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O）于1000mL容量瓶中，用水定容到刻度后混匀，用滤膜过滤后

3、备用。2.1.5氢氧化钠溶液（0.1mol/L）：称量4g氢氧化钠（NaOH），用水溶解于1000mL容量瓶中，定容到刻度后混匀。2.1.6硫酸溶液（0.5mol/L）：移取30mL的浓硫酸（H2SO4）到500mL水中，边搅拌边缓慢加入，冷却到室温后转移到1000mL容量瓶，定容到刻度后混匀。2.1.7甲醇水溶液：体积分数为50%。2.2标准溶液配制北京东西分析仪器有限公司2.2.1苯甲酸和山梨酸标准贮备液：每毫升含苯甲酸、山梨酸各500μg。准确称取苯甲酸、山梨酸标准品各50.0mg，分别置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解，并稀释至刻度。摇匀后，冷藏于冰箱中，有效期2个月。2.2.2苯甲

4、酸和山梨酸的混合标准工作液：每毫升含苯甲酸、山梨酸各10μg。分别吸取苯甲酸和山梨酸的标准贮备液各5mL，至250mL的容量瓶中，用甲醇水溶液定容至刻度后混匀。冷藏于冰箱中，有效期5d。三、仪器及工作条件3.1仪器3.1.1LC5500高效液相色谱（HPLC）仪：配有紫外检测器（北东西分析仪器有限公司）。3.1.2分析天平：感量为0.0001g（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。3.1.3超声波水浴（DS6150，Do-Chrom）。3.1.4滤膜：0.45μm。3.2色谱条件色谱柱：C18，250mm×4.6mm，5μm。流动相：甲醇—磷酸盐缓冲溶液=1＋4，0.45μm滤膜过滤。流速：1.

5、2mL/min。检测波长：227nm。柱温：室温。进样量：20μL。四、分析步骤及分析结果4.1试样处理4.1.1液态试样贮藏在冰箱中的乳与乳制品，应在试验前预先取出，并达室温，称量20g（精确至0.01g）样品于100mL容量瓶中。4.1.2固态试样称量3g（精确至0.01g）样品于100mL容量瓶中，加10mL水（40℃左右），用玻璃棒搅拌至完全溶解。4.2萃取和净化向盛有试样的容量瓶中加入25mL氢氧化钠溶液，混合后置于超声波水浴或70℃水浴中处理15min。冷却后，用硫酸溶液（约2mL左右）将pH调节到北京东西分析仪器有限公司8(用pH计或pH试纸均可)，然后加入2mL亚铁氰化钾溶液

6、和2mL乙酸锌溶液。剧烈振摇，静置15min，混合后冷却到室温，再用甲醇定容，静置15min，上清液经过滤膜过滤。收集滤液作为试样溶液，用于高效液相色谱仪测定。4.3测定吸取试样溶液和苯甲酸和山梨酸的混合标准工作液，注入色谱仪进行分析。以色谱峰面积定量。图1山梨酸、苯甲酸混合标准液谱图图2样品谱图4.4分析结果的计算北京东西分析仪器有限公司试样中苯甲酸、山梨酸的含量按下式计算:A×Cs×VX=As×m式中：X——试样中苯甲酸、山梨酸含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A——试样溶液中苯甲酸、山梨酸的峰面积；As——标准溶液中苯甲酸、山梨酸的峰面积；Cs——标准溶液的浓度，单位为微克每毫升（

7、μg/mL）；V——试样最终定容体积，单位为毫升(mL)；m——取样质量，单位为克（g）。经过计算，样品中山梨酸的含量为38.60mg/kg，苯甲酸含量为56.38mg/kg。4.5精密度相同的条件下测定三次，结果如下组分名称第一次测定第二次测定第三次测定RSD（％）结果（mg/kg）结果（mg/kg）结果（mg/kg）山梨酸39.6738.1437.992.41苯甲酸55.0057.9256.222.60五