罗汉果性别的分子标记研究

《罗汉果性别的分子标记研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、广西师范大学硕士学位论文罗汉果性别的分子标记研究姓名：黄姿梅申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：秦新民20070501罗汉果性别的分子标记研究年级：2004级研究生：黄姿梅导师：秦新民教授专业：生物化学与分子生物学研究方向：植物基因工程摘要罗汉果（Siraidiagrosvenorii(Swingle)C.Jeffrey）为葫芦科(Cucurbitaceae)罗汉果属(Siraitia)的雌雄异株植物，具有重要的医疗和保健价值，是广西特有的经济植物。罗汉果的栽培需要优良的罗汉果雌、雄品种。对罗汉果进行雌雄性别的分子标记研究，可为罗

2、汉果早期性别鉴定以及雌雄单株选育提供理论基础。本研究主要采用随机引物扩增多态性DNA(RAPD)技术和同工酶方法对罗汉果雌雄株进行性别分子标记等的研究。研究内容及结果如下：1.以栽培品种青皮果的雌雄株叶片为实验材料，用随机引物S60(ACCCGGTCAC),S90(AGGGCCGTCT)扩增得到与罗汉果雄性性别相关的DNA分子标记。根据引物名以及片段大小将差异带分别命名为S90-300、S90-400、S60-750。将这三条差异片段回收、克隆及测序，获得的序列大小分别为305bp,405bp,746bp。在NCBI数据库中用BLAST对这3个差异

3、片段进行序列同源性比较，结果表明这3个序列与其它生物体DNA序列同源性较小，且同源序列中未发现来自罗汉果或葫芦科的序列，表明这三个片段为罗汉果中新发现的DNA序列。BLAST分析表明：S90-300序列中的9bp-305bp与葡萄的基因组序列有67%同源性；180bp-220bp与小鼠X染色体上的41个核苷酸有82%的同源性；232bp-260bp与小鼠X染色体上的29个核苷酸有93%的同源性；201bp-243bp与人类X染色体上的43个核苷酸有81%的同源性；210bp-244bp与鸡W染色体上的38个核苷酸有86%的同源性。虽然均是来自动物的

4、染色体序列,但X、W染色体均为性染色体，因此我们认为S90-300序列可能与性别基因有一定程度的关系。S90-400序列与水稻的第8条染色体的29个核苷酸具有同源性，同源比率为93%。通过分析我们认为S90-400序列与控制不育性的QTL或是标记基因可能有一定的关系。另外，该序列与鸡Z性染色体上的40个核苷酸有87%的同源性，因此我们认为S90-400序列可能与性别基因有一定关系。S60-750序列在102bp-136bp、443bp-480bp片段位点分别与小鼠X染色体上不同位置的37、38个核苷酸有89%、86%的同源性；在560bp-584b

5、p、583bp-610bp分别与黑猩猩X染色体的25、28个核苷酸有92%、96%的同源性。X染色体为小鼠、黑猩猩的性染色体，因此我们认为S60-750序列可能与性别基因有较为密切的关系。2．以雄株和四个栽培品种（青皮、长滩、冬瓜、红毛）罗汉果雌株为实验材料，通I过雄性和雌性罗汉果基因组DNA池的RAPD-PCR扩增，对115个随机引物进行初步筛选，发现有8个引物在雌雄DNA池中有差异。经过重复性验证，结果表明：S47（TTGGCACGGG）、S103（AGACGTCCAC）能在雄集群DNA池中和单株分别扩增出约2600bp、1100bp的雄特异性

6、条带。而引物S43（AGACGTCCAC）则在所有品种的雌集群DNA池扩增出约650bp的雌性特异性条带。本实验为罗汉果性别连锁基因的克隆提供了一定的基础。3．应用EST同工酶分别分析了暴棚、红毛罗汉果实生苗幼苗叶片，结果每品种EST同工酶图谱均可分为两种模式，其中一种可能为雄性模式，另一种可能为雌性模式，结果有待罗汉果分化出性器官（花）后的最终验证。关键词：罗汉果；性别；RAPD；EST同工酶；克隆IISTUDIESONSEXOFSiraidiagrosvenoriiBYMOLECULARMARKERGrade:2004MasterCandida

7、te:HuangzimeiSupervior:Pro.QinxinminSpeciality:biochemistryandmolecularbiologySubject:plantengineringAbstractSiraidiagrosvenorii(Swingle)C.JeffreywasaspeciesofSiraitiainCucurbitceae，anditwasadioeciousmandapropereconomicplantinGuangxiprovince.Itisanimportantmedicinalmaterialuse

8、formedicationandhealthcare.Eximiousmaleandfemaleplantwasneedo