蜜柚泛素蛋白连接酶RINGH2finger基因的克隆和表达分析

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1、园艺学报2014，41（8）：1689–1698http://www.ahs.ac.cnActaHorticulturaeSinicaE-mail:yuanyixuebao@126.com蜜柚泛素蛋白连接酶RING-H2finger基因的克隆与表达分析*金晓琴，康振，刘伟娜，潘永娟，王梨嬛，郭卫东，杨莉（浙江师范大学化学与生命科学学院，浙江金华321004）摘要：在26S泛素蛋白酶体途径介导的蛋白质降解过程中，RINGfinger蛋白是一类特殊的泛素蛋白连接酶，参与植物多个生长发育及逆境胁迫响应过程。为探明柚RINGf

2、inger家族成员的序列特征及表达模式，从红肉蜜柚和琯溪蜜柚果实汁胞中分离出两个RINGfinger基因cDNA片段（CgRHF1和CgRHF2），采用实时荧光定量PCR研究其在不同组织及果实发育不同时期的表达模式。结果表明，两个基因均属于RING-H2finger家族成员，且红肉蜜柚与琯溪蜜柚的两个CgRHF之间碱基序列均无差异；除根组织外，CgRHF1表达水平较CgRHF2高，且在红肉蜜柚茎、叶和花中的表达水平显著高于琯溪蜜柚；CgRHF2在组织及果实发育过程表达水平均较低，但在果实成熟采摘阶段急剧上升。CgRHF

3、1与CgRHF2表达模式的差异暗示这两个基因在柚组织及果实发育进程中行使不同的生物学功能，而非功能互补基因。关键词：红肉蜜柚；琯溪蜜柚；RING-H2finger基因；克隆；基因表达中图分类号：S666文献标志码：A文章编号：0513-353X（2014）08-1689-10IsolationandExpressionAnalysisofTwoUbiquitin-proteinLigaseRING-H2FingerGenesfromPommelos[Citrusgrandis（L.）Osbeck]*JINXiao-qi

4、n，KANGZhen，LIUWei-na，PANYong-juan，WANGLi-huan，GUOWei-dong，andYANGLi（CollegeofChemistryandLifeScience，ZhejiangNormalUniversity，Jinhua，Zhejiang321004，China）Abstract：RING（RealInterestingNewGene）fingerproteinsspecifythesubstratesinthe26Subiquitin-proteasomepathway，a

5、ndplayimportantrolesinplantdevelopmentandstressresponses.However，thesequences，expressioncharacteristicsandphysiologicalfunctionsofRINGfingergenesinpommeloarelittleknown.Inthisstudy，twoRINGfinger（CgRHF1andCgRHF2）cDNAfragmentswereisolatedfromRed-fleshedandGuanxipo

6、mmelo.TheresultsshowedthattwoCgRHFswerebelongedtoRING-H2fingersubfamilies，andthereisnoDNAbasedifferenceinthesequencesoftwocultivars.Quantitativereal-timePCRresultsshowedthatgeneexpressionofCgRHF1issignificantlyhigherthanCgRHF2，especiallyinthestems，leavesandflowe

7、rsofred-fleshedpommelo.TheexpressionlevelsofCgRHF2wererelativelylowinthetissuesandfruitdevelopmentoftwopommelocultivars，butdramaticallyincreasedatthefruitmaturestage.ThisstudyhasimpliedthatCgRHF1andCgRHF2mayplaydifferentrolesinthetissuesandfruitdevelopmentofRed-

8、fleshedandGuanxipommelo，andcannotfunctionallycomplement.收稿日期：2014–03–04；修回日期：2014–07–22基金项目：国家自然科学基金项目（30900978）；浙江省自然科学基金项目（LY14C150001）*通信作者Authorforcorrespondence（