羧甲基壳多糖微载体CX2研制及细胞培养研究

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1、中国海洋大学硕士学位论文羧甲基壳多糖微载体CX-2、研制及细胞培养研究姓名：刘成圣申请学位级别：硕士专业：海洋生物指导教师：陈西广;刘万顺2003.12.1羧甲基壳多糖微载体CX-2研制及细胞培养研究摘要微载体培养法是一种将贴壁培养和悬浮培养完全融为一体的较为理想的动物细胞大规模培养方法。此种模式的细胞培养对微载体的质量要求很高，而当前商品化的微载体均有其不完善之处，因此，理想微载体的玎发仍然是微载体研究的方向。本文以羧甲基壳多糖(cMCH)为材判，研制⋯种用于动物细胞培养的新型微载体—cx2。依次进行了cMcH特性粘度、脱乙酰度、羧基化度的研究；CX一2微载体的制备工艺优

2、化彤f究；CX．2微载体的组织亲和性硎究以及动物细胞培养实验，为新型微载体的规模化制备及应用提供了一定的理论依据。羧甲基壳多糖(cMCH)为壳多糖的水溶性羧甲基衍，{i物。实验结果农明：可以由特定分子量CH制各相应分子量的CM—CH；CH经系列反应后，脱乙酰度和羧基化度稳定。特性粘度260ml／g，脱乙酰度大于90％，羧基化度大于85％的CM—CH为CX．2微载体较好的制备材料。通过优化r艺制备的CX2微载体，在色泽、干燥失重、比表面积、成球率、密度、直径、『歧水量、溶胀度、粒度分布、表面结构、机械强度、稳定一阽等理化指标，_Pharmacia公司Cytodex一3微载体相

3、当，但成本价格要低得多。cx2微载体在较宽的pH范围内，对血清蛋白均有明显的吸附，有}良好的组织相容性。Vero细胞、BHK细胞、BB细胞均能较好的粘着f-CX．2微载体』二，在24—72h期间细胞生长增殖速度最快，120h时细胞已早现多』。：次生长状态，并可以实现细胞向新加入的微载体上转移。再生后的CX一2，可继续用于动物细胞培养，效果无明显变化。实验表明：cx2用于大规模动物细胞培养是可行的。关键词：微载体羧甲基壳多糖制备组织相容性细胞培养CX．2microcarrierpreparationandthecharacteristicsincellcultureAbstr

4、actThecultivationonmicrocarriers(MCs)isaperfectmethodonthelarge-scaleanimalcellculture，whichisthecompletecombinationofadhesivecultureandsuspendingculture．InthissystemthepropertiesofMCsarecriticaleffecttocellculture，infactthereisstillnooneperfectMCinall-presentcommercialproducts．Therefore，i

5、tisnecessarytodevelopsuperiorqualityMCs．Inthisresearch，anewMC，CX-2hasbeendevelopedusingCarboxymethyl—chitosan(CM—CH)．Inthispaper,therelationshiponinherentviscosity,degreeofdeacetylationanddegreeofcarboxymethylhasbeenstudied；thepreparationprocessofCX-2，thehistocompatibilityandtheanimalcellc

6、ulturehavebeendescribed．TheresultsprovidefoundationaltheoriesforpreparationoftheMCsandapplicationinlarge—scaleanimalcellculture．CM-CHiSawater-solublederivaiveofchitosan．TheresultsmanifestthatitisadvisabletopreparecertainmolecularweightCM-CHfromcorrespondingMWCH；Deacetylationdegreeandcarbox

7、ymethyldegreeofCHareunchangedafteraseriesofreactions．TheoptimalrawmaterialofCM-CHtoprepareis：viscosity260ml／g，deacetylationdegreemorethan90per,andcarboxymethyldegreemorethan85per．Theph)，sicochemicalpropertiesofCX--2correspondtoCytodex·-3MCproducedbyPharmacia，i