环磷酰胺对不同发育时期睾丸生精细胞毒性损伤的动物实验研究

《环磷酰胺对不同发育时期睾丸生精细胞毒性损伤的动物实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、重庆医科大学硕士学位论文环磷酰胺对不同发育时期睾丸生精细胞毒性损伤的动物实验研究姓名：岳丽琴申请学位级别：硕士专业：儿科学（泌尿外科）指导教师：李旭良2003.5.1重庆医科大学硕士研究生学位论文英文缩写一览表英文缩写英文全称CTXCyclopbosphamideBcl—-2B--celllymphoma-2PIPropidiumIodideTUNELTerminaldeoxynucleotidyltransferasemediateddUTPnickendlabelingFCMPODDNaseODDNAPBSSABCHETGn

2、RHECMSETBSFlowcytometryPeroxidaseDeoxyribonucleaseOpticaldensityDeoxyribonucleicacidPhosphateBufferedSalineStrept-Avidin—BiotincomplexHemotoxylinandEosinStairmingTestostemneGonadotropin-releasinghormoneEstrogenCountmeasurespermatogenicepitheliumTubularbiopsyscored中文全

3、称环磷酰胺B细胞淋巴瘤．2碘化丙啶脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法流式细胞仪过氧化物酶DNA酶光密度脱氧核糖核酸磷酸盐缓冲的生理盐水链霉亲和素．生物素一酶复合物苏木素．伊红染色睾酮促性腺激素释放激素雌激素生精上皮细胞计数睾丸活检评分蕈庆医科人学硕L研究生学位论文环磷酰胺对不同发育时期睾丸生精细胞毒性损伤的动物实验研究摘要目的通过CTX对不同发育时期睾丸生精细胞毒性损伤程度的研究，探讨是否年龄越小抗肿瘤药物对生精细胞的损害越轻，从而为性腺保护剂的运用寻找理论依据。I方法取1周，3周，5周，9周雄性Wistar大

4、鼠，分别对应大鼠L睾丸生精细胞发育的不同阶段，即精子发生前阶段，早期精子发生时期，精子发生时期和性成熟阶段，每年龄组24只，按配对的方法分为12对，再随机分为用药早期组(用药后24小时处死)和用药后期组(用药后9周处死)各6对，每对再随机分到实验组和对照组。早期组于用药24小时后处死动物取睾丸标本，用TUNEL法检测生精细胞的凋亡率，免疫组化检测凋亡相关基因Bcl一2的表达情况；流式细胞仪检测生殖细胞周期。后期组于用药9周后处死动物取睾丸组织标本，光镜观察曲细精管的病理改变，并计算曲细精管平均直径，面积、生精上皮细胞计数(CMS

5、E)、Johnsen’S评分。结果1CTX对不同发育时期睾丸的急性期损伤：1．1生精细胞凋亡的检测：蕈庆医科大学硕士研究生学位论文1周，3周，5周，9周的正常对照组存在一个自然凋亡过程，其中以3周时期最高，而1周时几乎未见凋亡发生，用CTX干预后，除1周外，各年龄组与相应对照组比较均有显著差异(P<0．01)，其中实验组和对照组中均以3周和5周的凋亡率最高，但二者之间无显著差异(P>0．05)。1．2BCL一2蛋白的表达：各对照组及实验组与上述生精细胞的凋亡改变成正相关。除l周组外，各年龄组中实验组均比相应对照组显著下降(P<0

6、．叭)，且正常对照组及实验组中在3周时的表达率均为最高。1．3流式细胞仪检测生精细胞s期所占的比例：除1周组外，各年龄组中实验组均比相应对照组显著下降(P<0．01)，其中，以3周龄和5周龄组的S期下降最显著，但在对照组和实验组中，S期所占的比例3周和5周之间均无显著差异(P>O．05)。2CTX对不同发育阶段睾丸毒性损伤的远期结果：成年期大鼠除1周年龄组外，各年龄组中实验组的曲细精管面积、直径、生精上皮细胞计数、Johnsen’s评分均显著低于相对应对照组(P<0．01)，并且随着年龄的增大，损害有增加的趋势，配对比较方差分析

7、发现3周，5周，9周之间有显著性差异(P

8、生精细胞凋亡与抑制凋亡的基因BCL．2的表达下调有关。(4)CTX可显著抑制精原细胞和细线前期的精母细胞的增殖，以生精发育活跃时更明显。(5)通过对CTX所致睾丸远期毒性损伤的组织学检测，表明年龄越小所受的损害越小；其中未发育睾丸对CTX的毒性损伤耐受性最强，证