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《成骨细胞在机械力刺激下细胞骨架及细胞形态改变的体外研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、中国腔领面外科杂志助年月第卷第期一一一文章编号科以成骨细胞在机械力刺激下细胞骨架及细胞形态改变的体外研究戚孟春,胡静,韩立赤,邹淑娟,王大章四川大学华西,口腔医学院四川成都。一的变化【摘要】目的探讨大鼠颅骨成骨细胞对机械力刺激的反应及细胞骨架方法体外分离培养大,,、、、鼠颅骨细胞应用四点弯曲加力系统对第代细胞施加《刃卜￡的机械牵张力加力时间分别为,应用特异性荧光染料分别标记微丝蛋白一和细胞核在激光共聚焦显微镜下观察并进行形态计量学测量。应用法进行原位凋亡检测。结果在机械张力刺激下,荧光强度减弱,一纤维束变得稀疏而
2、排列紊乱胞核轮廓模糊,并可观察到凋亡小体。定量分析表明,的荧光总强度、绿色荧光强度一和红色荧光强度胞核均显著下降或。检测也表明,随着加力时间延长,凋亡细胞数明显增加但明显少于一发生改变的细胞数。结论机械牵张刺激可引起细胞骨架一解聚和重排,并诱发部分细胞发。生凋亡【关键词」成骨细胞机械应力凋亡激光共聚焦显微镜【中圈分类号【文献标识码切一,,一,,一,一了尹衬更沂双以叫耐朋,。,岁。邵、动乎滚斤尹二卿跳一、·、〕卜林,,一一·一一一汀,,一,,,『,一、〔一·抽。人加比胶“,峨、、正常骨组织改建骨折的修复正畸牙移动以
3、及牵张成骨等都离不开机械力学刺激,而生理状态的日期」一一【【〕一一,【收稿修回日期】周期性机械力刺激是骨组织新生的基础其中成骨【鑫金项目】国家自然科学基金,【作者简介】戚孟春一,男,博七研究生主治医师细胞是对机械力反应的最终效应细一,通讯作者胡静介一胞。最新研究表明,机械力刺激引起的复杂的细胞信】,年版权归《中国口腔领面外科杂志》编辑部所有号传导网络中细胞骨架系统的改变是其中重要的©1994-2009ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsre
4、served.http://www.cnki.net戚孟春,等成骨细胞在机械力刺激下细胞骨架及细胞形态改变的体外研究一,甲。,一环洗涤次每板加入闪孵育液内含与一聚合态肌动蛋白是微丝蛋白的主要专一性结合的绿色荧光标记物,形式对细胞的多种功能起着重要的调控作用微和胞核特异性红色荧光染料、。一丝与其相关蛋白整合素和细胞外基质形成℃避光孵育洗,,,。有机的复合体参与细胞内外的多种信号传导和涤次缓冲甘油封片下观察。,,物质运输本研究利用荧光标记技术通过激光扫巧对的扫描参数均为描共聚焦显微镜,,。,,,,,。,叩观察探讨在周
5、期性机械力学刺应用恤印图像处理软件随机对每一培养激下细胞的反应及骨架蛋白一发生的变化,板上个边界清晰的细胞进行图像分析,测量各项为力学刺激下骨组织细胞信号应答网络的进一步形态学参数细胞总面积、总的荧光密度、绿色荧光。。研究提供实验依据密度和红色荧光密度,法进行凋亡细胞检测材料与方法,取每组个塑料板采用法进行原位、。,,,,实验动物主要试剂和仪器凋亡检测加力完成后塑料板用冲洗次多聚甲醛,,大鼠购自四川大学华西医学中心实验动物℃固定再次冲洗。、一,部均购自公司穿透按试剂盒说明在反应液,。一购自公司中℃孵育冲洗次各用、
6、、一图像处理软件甲均来自在℃下孵育再次冲。,,。公司原位凋亡检测试剂盒购自德国洗用显色细胞核用快绿复染用找公司。【·,,,大鼠颅骨的分离和培养处理的未。,颅骨成骨细胞分离采取骨组织块法无菌条件加力细胞为阳性对照在检测中去除酶作为阴下取新生的乳鼠颅骨,用含双抗的液洗涤性对照,每板至少分析个细胞均匀分布的视野,,一。,一阳性细胞胞核染为深蓝色次去净内外骨膜及软组织将颅骨剪成而的细胞视野,。碎片均匀铺散在的培养瓶底壁上将培养瓶表现为染色质浓聚或不规则的颗粒状由位技师,,底面朝上小心加人含的进行盲法测量结果用凋亡指数来表
7、示凋亡细、,心翻。培养基℃的培养箱内培养小胞占所有观察细胞的百分比转培养瓶,继续培养。一后更换培养基,去除骨组统计学分析。织碎片细胞长满培养瓶时消化传代取第代细计量资料用软件进行单因素方差分,、,一胞经含地塞米松甘油磷酸钠和抗坏血酸的培析方差齐性时多重比较用比法方差,。养基培养周后多数细胞表现为碱性磷酸酶染色不齐时用法阳性,周后可形成明显的矿化结节,茜素红染色为结果。鲜红色证实所获成骨细胞具有体外成骨功能机械加力及激光共聚焦显微镜分析,激光共聚焦显微镜观察,细胞加力采用四川大学华西口腔医院正畸科大鼠颅骨成骨细胞未
8、加力时细胞形和电子科技大学联合研制的四点弯曲加力系统进态呈典型的多角形,荧光染色强一纤维呈束。,,,,,行取第代接种于特制塑料培养板上继续状平行排列纤维较粗分布均匀应力纤维清晰可,,。培养后将培养板放入特制的加力皿内在加见细胞中央可见椭圆形红染的细胞核图。,,,力装置上进行加力加力参数为位移频率细胞受力后许多细胞荧光强度减弱细胞,。,一此时细胞受力为以不每种细胞分为加力体
