双氧水对鼻咽癌细胞生长特性的影响及其机制的初步研究

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1、双氧水对鼻咽癌细胞生长特性的影响及其机制的初步研究【关键词】人低分化鼻咽癌细胞；H2O2；肿瘤相关基因；细胞培养；肿瘤治疗【摘要】目的:观察H2O2对人低分化鼻咽癌细胞（CNE2Z）生长、增殖能力的影响，并探讨其可能机制。方法:用MTT及平板克隆形成实验、WesternBlot等检测H2O2诱导CNE2Z后增殖能力、EGR1、p53、p16、CyclinD1的表达。结果：不同浓度H2O2可不同程度地抑制CNE2Z细胞的生长增殖能力，同一时间点各实验组细胞抑制率相比差异有统计学意义，抑制率与H2O2浓度间表现出明显的剂量效应关系。平板克隆形成实验的抑制率较MTT更明显。C

2、NE2Z无EGR1、p16蛋白表达，可见p53、CyclinD1蛋白表达；诱导培养后EGR1、p53、CyclinD1蛋白表达明显增加。结论：一定浓度的H2O2能抑制CNE2Z细胞生长，其作用可能与EGR1及p53蛋白表达增强有关；Egr1基因在CNE2Z中具有可诱导性，在肿瘤治疗中有一定的应用前景。【关键词】人低分化鼻咽癌细胞；H2O2；肿瘤相关基因；细胞培养；肿瘤治疗【Abstract】Objective:ToobservetheeffectsofH2O2ontheproliferationofnasopharyngealcarcinomacellline(CNE2

3、Z)andstudythepossiblemechanisms.Methods:TheCNE2ZcellsweretreatedwithH2O2;theassaysofMTTandplatecolonyformationwereusedtomeasuretheabilityofproliferationofCNE2Zcells;9thewesternblotwasusedtodetecttheproteinlevelsofEgr1,p53,p16andcyclinD1.Results:Inadosagedependentmanner,H2O2inhibitedthepr

4、oliferationofCNE2Zcells,shownbyboththeMTTandplatecolonyformationassayswithstrongerdisplayingintheplatecolonyformationassay;withouttreatmentofH2O2CNE2Zcellsexpressslightp53andcyclinD1proteinsbutnodetectableEgr1andp16proteins;aftertreatmentwithH2O2,CNE2ZexpresssignificanthigherproteinsofEg

5、r1,p53andcyclinD1withnodetectablechangep16protein.Conclusion:H2O2mightinhibittheproliferationofCNE2Zthroughincreasingthe　expressionsofEgr1andp53proteins;sinceEgr1expressionwasinducible,Egr1mightbeatargetinthetumortherapy.【Keywords】nasopharyngealcarcinoma;H2O2;tumortherapy;tumorproliferat

6、ion鼻咽癌（NPC）是一种具有显著种族及地理分布特点的恶性肿瘤，以我国华南及东南亚地区高发。鼻咽癌的治疗目前仍以放射治疗为主，但5　a生存率低于50%，远处转移或复发是鼻咽癌患者死亡的主要原因。H2O2可以增强放射抵抗细胞的放射敏感性，放射后细胞ROS(Reactiveoxygenspecies)生成减少是肿瘤细胞的放射抵抗的重要原因。本实验观察H2O2对鼻咽癌细胞生长、增殖的影响及其相关癌基因的表达。91材料与方法1.1材料细胞系:人鼻咽低分化鳞癌细胞系CNE2Z，广东医学院病理学教研室建株保存。1.2主要试剂兔抗人EGR1多抗（SantaCruz,USACat:S

7、C110）；小鼠抗人p53单抗（野生型，英国曼彻斯特Paterson癌症研究中心分子生物系提供）；小鼠抗人p16单抗（DAKO，Cat：SC245）；小鼠抗人CyclinD1单抗(SantaCruz,USACat:SC19992)；HRP标记山羊抗兔IgG(H+L)(北京中山，Cat:ZB2305)；WesternBlottingLuminolReagent(SantaCruz,USACat:SC2408)；X线片(Koda,USA)；显影液、定影液(广州天朗涂料化工有限公司)。1.3细胞毒实验（MTT法）取对数生长期细胞（细胞密度为1×