双氧水对鼻咽癌细胞生长特性的影响及其机制的初步研究论文

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1、双氧水对鼻咽癌细胞生长特性的影响及其机制的初步研究论文【关键词】人低分化鼻咽癌细胞；H2O2；肿瘤相关基因；细胞培养；肿瘤治疗【摘要】目的:观察H2O2对人低分化鼻咽癌细胞（E2Z）生长、增殖能力的影响，并探讨其可能机制。方法:用MTT及平板克隆形成实验、TT更明显。E2Z无EGR1、p16蛋白表达，可见p53、CyclinD1蛋白表达；诱导培养后EGR1、p53、CyclinD1蛋白表达明显增加。结论：一定浓度的H2O2能抑制E2Z细胞生长，其作用可能与EGR1及p53蛋白表达增强有关；Egr1基因在E2Z中具有可诱导性，在肿瘤治疗中有一定的应用前景。【关键词】

2、人低分化鼻咽癌细胞；H2O2；肿瘤相关基因；细胞培养；肿瘤治疗【Abstract】Objective:ToobservetheeffectsofH2O2ontheproliferationofnasopharyngealcarcinomacellline(E2Z)andstudythepossiblemechanisms.Methods:TheE2ZcellsationeasuretheabilityofproliferationofE2Zcells;theanner,H2O2inhibitedtheproliferationofE2Zcells,shoation

3、assaysationassay;entofH2O2E2Zcellsexpressslightp53andcyclinD1proteinsbutnodetectableEgr1andp16proteins;aftertreatmentightinhibittheproliferationofE2ZthroughincreasingtheexpressionsofEgr1andp53proteins;sinceEgr1expressionightbeatargetinthetumortherapy.【Keya;H2O2;tumortherapy;tumorproli

4、feration鼻咽癌（NPC）是一种具有显著种族及地理分布特点的恶性肿瘤，以我国华南及东南亚地区高发。鼻咽癌的治疗目前仍以放射治疗为主.freelinolReagent(SantaCruz,USACat:SC2408)；X线片(Koda,USA)；显影液、定影液(广州天朗涂料化工有限公司)。1.3细胞毒实验（MTT法）取对数生长期细胞（细胞密度为1×105～2×105/mL），接种于96孔培养板（200μL/孔）。待细胞长成单层后，换以含H2O2的培养液使其终浓度分别为0、15、25、50μmol/L，然后分别培养2、4、6h，再加入MTT15μL/孔（浓度为5

5、mg/mＬ），37℃培养箱中放置4h后终止培养；吸弃各培养孔内上清液，于每孔加入150μL的二甲基亚砜，震荡摇匀，37℃放置2h，在全自动酶标仪上以波长490nm及570nm测各孔吸光度，结果以各组6孔OD均值±标准差（±s）表示。计算H2O2对细胞增殖的毒性以抑制率来反映，其抑制率（IR）的计算公式为：细胞抑制率IR（%）=（对照组OD值实验组OD值）/对照组OD值×100%。1.4平板克隆形成实验取对数生长期细胞以每孔300个接种于24孔培养板，观察不同浓度（15、25、50μmol/L）的H2O2使用液，培养2、4、6h后，继续常规培养7～10d。计算每孔的

6、克隆数，50个细胞以上者计为一个克隆，并按以下公式计算克隆形成率。克隆形成率（%）=平均克隆数/接种细胞数×100%；抑制率（%）=（对照组克隆数实验组克隆数）/对照组克隆数×100%。1.5TT及平板克隆形成实验结果表明，不同浓度H2O2可不同程度地抑制E2Z细胞增殖，同一时间点各实验组细胞抑制率相比差异有统计学意义（P0.001），且抑制率与H2O2浓度间表现出明显的剂量－效应关系。平板克隆形成实验之抑制率较MTT更明显。见表1、2。表1不同浓度H2O2对E2Z细胞系的抑制率（%）―MTT注：在同一时间范围内，各不同浓度组与对照组比较差异有统计学意义（P0.0

7、01）。2.2期，与我们的实验结果有所差别。由于E2Z细胞系中尚存在一个野生型p53等位基因，因此我们推测H2O2可以通过诱导EGR1表达并进一步激活野生型p53而致细胞周期阻滞于G1期，两者可能在H2O2所致的细胞生长抑制及凋亡中起重要作用。我们在实验中发现H2O2可以诱导E2Z细胞表达EGR1，EGR1表达有助于提高肿瘤细胞的放射敏感性，因此在肿瘤放射治疗中，联合应用H2O2对某些具有放射抵抗的肿瘤可能具有一定的意义。