修饰的蛇神经毒素治疗肌张力增高的实验研究

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1、重庆医科大学硕士学位论文修饰的蛇神经毒素治疗肌张力增高的实验研究姓名：魏有东申请学位级别：硕士专业：神经内科学指导教师：谢鹏2003.6.1重庆簸科大学硕士学位论文符号说鞘茭文名称SodiumdodecylsulfateBovineserumalbuminTris(hytroxymethyl)aminomethane心volutionsperminuteRoomtemperatureEthylenediaminotetraaceticacidN-ethylmaleimideanionicexchagephosphate-

2、bufferedsalineOpticaldensity1Yis．bufferedsalinepolyacrylamidegelelectrophoresismilliliterdiethylaminoethylmicrolitermicrogramionexchagechromatographyamyotrophiclateralsclerosismillimolmedianlethaldose中文名称十二烷基硫酸钠牛血清囱蛋白三羟酉等基氨蒸擎演每分钟转速室温乙二胺籀乙酸N．乙基顺丁烯二酰亚胺阴离子交换磷酸盐缓滓液光密

3、度Tris盐缓冲液聚丙矮簸胺凝胶毫泳爨升二乙胺赫乙基微升微克离子交换柱层析瓿萎缩褴德索硬纯痉爨摩尔半数致死量瞒螂姒I毒㈣姐一枞一麟∞

4、量一州一潼甥∽燃一㈣重痰莲拜走荦磺舌学位论文修饰的蛇章枣经毒素治疗肌张力增高的实骏磷究摘要f酱豢秘嚣懿：郝分辩经滚痰熟脑卒中矮遗穰瘫，脊髓撰饶，帕金k森痛等，常有硝显、持久的瓶张力增商，这给患者的心理、生活、工作等方面带来种种负担及痛蒉。越褥有效治疗肌张力增裹，是影蛹臻蠹癞壤发展和是否骞毫够康复豹关镶。嚣薄雷内外有效治疗鼹强力增高的药物甚少，现已知治疗肌张力增毫的药物仅臌于是氯芬等瓶游松懿

5、荆。该类勰物疗效不稳定，副作用较大，鼠作用局限。对予谶腿痉挛等较常见酶藏张力障礴性神经疾癍，临床上已成功应怒了A型离毒毒素，取褥了显萋的疗效。僵蠢予只能蜀都使雳等妖黧，限制了其应用范围。得找一种款的治疗腿张力增离的麟物和方法已怒神经瘸学临床工作中亟待解决的难题。烷神经毒素是蛇毒孛毒瞧最大国成分，麓嫠黎秘产生骢缓缝麻痹釉湃啜衰竭。按生物活性不闷，蛇神经毒索可分为两癸；一类是突触前神经毒索，该毒褰可抑制圣申经传姆中乙酰胆碱的释放；另一类是突触鬟替经毒素，该毒素麓与运动终援乙懿疆碱受髂结含露导致q缸神经传导阻蹶。，本实骏通过改

6、变蛇霉枣缀毒素毒性，照予治疗鼹张力增离的动物，希望能为临床治疗肌张力增高提供～种新方法。本研重庆医科大学硕士学位论文究目的：1．从蛇毒中提取出神经毒索成分。2．通过化学修饰减低‘——_，。—一神经毒索的毒性。3．将修饰后的神经毒素用于脊髓损伤大鼠模型，了解其有无肌肉松弛的作用。f“f方法：蛇毒依次经DEAE—SephadexA-50柱，SephadexG一50柱层析，然后对洗出的各峰进行神经毒素的鉴定。收集神经毒素峰，用Folin--phend法测量神经毒索蛋囱的浓度。通过小鼠毒性实验，SDS—PAGE电泳对神经毒索峰进

7、行纯度鉴定，并计算出神经毒素的LDso。对蛇神经毒素的巯基，氨基进行化学修饰，通过小鼠实验鉴定修馋后魏神经毒素的毒’陡。将修馋后黪神经毒素用于脊髓损伤大鼠模型，鼹察太鼠腿张力增高套无改善。结果：透过小鼠憋神经毒燃表魏以及生理记录仪证实，洗脱液峰2跫裤经毒素。鬟Folin--phend法测量聿枣经毒素峰蛋自浓度为o．01389／ml。神经毒素在SDS—PAGE邂泳分专斤中基本为单一隧带，根据染色灵敏度估算，纯度可能大于80％；置与小鬣毒褴实验一致。神经毒素的LDso为1．1img／kg。用乙酸酐，NEM修饰神经毒素磊其3毒

8、性降低，并且仍有松弛大鼠肌张力增高睛作糟。卢勺结论：1．蛇毒依次经DEAE．SephadexA．50柱，SephadexG．50柱层析后，可成功提取出神经毒素。2．用乙酸酐，NEM等对神经簿素进行化学修饰，可见其神经3薰庆医科大学硕士学位论文毒性减低。而NEM化学修饰神经毒素盾神经毒性减低相对明显。3．修饰籍的神经毒索用于肌张力增高的脊髓损伤大鼠，可见肌张力增高有改虢，并且大鼠存活时间延长，特别是NEM化学修饰后的神经毒素。表明化学修旆蛇神经毒素商明显减毒作用。rp／l7关键词：{实验研冠肌张力增高，修碡的神经毒索4重庆

9、医砖大学硕士学位论文THEEXPERIMENTALRESEARC珏oFT}lETREATMENToFMUSCULARllYPERToNlABYUSINGTHEMoDIFIEDNEUROTOXlNlNTHESNAKEVENoMBaekgroundandObjective：ABST鼗ACTSomeneurological