清肺口服液拮抗呼吸道合胞病毒感染的血清药理学研究

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1、作者:赵长江,袁斌,徐建亚,王莉,孔飞【摘要】 目的评价清肺口服液抗呼吸道合胞病毒(rsv)的活性。方法采用mtt法,以利巴韦林为对照组,观察清肺口服液及不同给药方式对rsv的拮抗作用。结果清肺口服液具有明显抗rsv的作用,与利巴韦林比较差异无统计学意义;清肺口服液的作用机制可能为抑制病毒吸附或增殖。结论清肺口服液可以通过不同环节拮抗rsv病毒,是治疗rsv感染的有效复方制剂。【关键词】 清肺口服液;呼吸道合胞病毒;中药血清药理学   abstract:objectivetoevaluatetheanti-rsvactivityofqingfeior

2、alliquid.methodwithribavirinasthecontrol,theantagonisticeffectofqingfeioralliquidanddifferentadministrationmethodsonrsvinfectionwereobservedbymtttechnology.resultqingfeioralliquidhadobviouseffectionofanti-rsv,showingnosignificantdifferencecomparedwithribavirin.theactionmechanis

3、mmaybethatqingfeioralliquidhasinhibitioneffectsonadsorptionorproliferatingofrsv.conclusionqingfeioralliquidcanantagonizersvthroughdifferentlinkages.itisaneffectivecompoundpreparationfortreatingrsvinfection.    keywords:qingfeioralliquid;respiratorysyncytialvirus;serumpharmacolo

4、gyoftraditionalchinesemedicine    呼吸道合胞病毒(respiratorysyncytialvirus,rsv)是引起婴幼儿病毒性肺炎和毛细支气管炎的主要病原体,约占婴幼儿肺炎病例总数的5%~40%,同时,也常引起成年人尤其是老年人的呼吸道感染,但目前尚无有效的预防和治疗方法。清肺口服液主要由炙麻黄、杏仁、葶苈子、虎杖等药物组成,临床研究取得了满意的效果1,但其作用机理尚未完全阐明。本实验欲从血清药理学方面对其做一探讨。  1 实验材料  1.1 动物   大耳白兔14只,雌雄不拘,健康无病,体重2.5~3kg,南京市

5、清凉山实验动物基地提供,合格证号:scxk(苏)2007-0008。  1.2 细胞与病毒     人喉癌表皮细胞hep-2,由凯基生物科技细胞中心提供,本实验采用第3~30代细胞。呼吸道合胞病毒b亚型(rsvb型),博特生物有限公司提供。  1.3 试剂  dmem(美国gibco公司);新生牛血清(杭州四季青公司);细胞培养液:dmem加10%新生牛血清;细胞维持液:dmem加2%新生牛血清;0.25%胰酶(美国gibco公司);3-(4,5-二甲基噻唑基)-2,5-二苯基四氮唑溴化物(mtt,amerssco);二甲基亚砜(dmso,上海永华特

6、种化学试剂厂)。  1.4 仪器  酶联免疫检测仪,exl800型,美国biotek;倒置显微镜,olympusbx-50。  1.5 药物及含药血清的制备   清肺口服液,南京中医药大学植物药研究中心提供,每剂含原药材10mg/ml。含药血清的制备:清肺口服液给健康大耳白兔灌胃,剂量为48g/(kg?d),是临床等效剂量(12g/kg)的4倍,每日分2次灌服,连续给药3d。末次给药后禁食不禁水12h,在家兔清醒状态下颈动脉采血,无菌分离血清,制成血清冻干粉-20℃保存备用。同时设空白对照,灌服等体积生理盐水,取血清方法同前。利巴韦林注射液:华北制药

7、集团制剂有限公司产品,批号051202。  2 实验方法  2.1 分组   设含药血清组、空白血清组、利巴韦林组、病毒对照组及细胞对照组。  2.2 细胞培养   将复苏后的细胞以1×106/瓶接于25ml培养瓶中,加入3mldmem培养基。置37℃、5%co2饱和湿度条件下培养。待细胞长至约90%后,用0.25%胰酶消化,进行传代培养。  2.3 病毒的扩增     待细胞在板或瓶中长满60%~70%后,吸去液体,加入适量(500~1000μl)病毒液,37℃、5%co2培养箱中吸附2h后,补维持液3ml。逐日观察细胞病变(cpe,典型病变是融合

8、的大泡),病变达75%以上时收集病毒。  2.4 利巴韦林及含药血清最大无毒浓度测定     hep-2细胞

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